猪传染性胃肠炎病毒半巢式RT-PCR检测方法的建立及应用

作     者：孙斌 李明月 林思雨 申贵男 毛瑞锋 颜子涵 王一 孙东波 原冬伟 SUN Bin;LI Ming-yue;LIN Si-yu;SHEN Gui-nan;MAO Rui-feng;YAN Zi-han;WANG Yi;SUN Dong-bo;YUAN Dong-wei

作者机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 

基　　金：黑龙江八一农垦大学学成引进人才科研启动计划项目(XYB2014-11) 黑龙江省大学生创新创业训练计划项目(201810223047) 黑龙江八一农垦大学三横三纵支持计划项目(ZRCPY201907) 黑龙江省自然科学基金项目(C2018049) 黑龙江八一农垦大学青年创新人才培养项目(CXRC2017016) “十三五”国家重点研发计划项目(2017YFD0501604-5) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2020年第50卷第5期

页      码：556-562页

摘      要：为建立一种高效、敏感、特异的用于检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的半巢式RT-PCR方法,本研究依据GenBank发表TGEV的N基因序列设计3条特异性引物,通过优化反应体系,建立了检测TGEV的半巢式RT-PCR方法,并对反应体系特异性和敏感性进行了检测。结果显示,该方法能够成功扩增483 bp和338 bp两条目的条带;对TGEV具有良好的特异性,与猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、猪博卡病毒、猪德尔塔冠状病毒均无交叉反应;最低可检测到1.86×10^-1pg/μL的TGEV cDNA。用所建半巢式RT-PCR对临床50份猪腹泻样品进行检测,结果显示,阳性率为36%,高于普通RT-PCR阳性检出率,且阳性样品符合率为100%。本试验所建立的半巢式RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性好,可准确地对TGEV感染做出诊断,为TGEV的临床检测、流行病学调查提供了有效手段。

主 题 词：猪传染性胃肠炎病毒 半巢式RT-PCR 检测方法 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2020.0062

馆 藏 号：203922831...