传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白VP2、VP1和VP2-VP1串联基因的原核表达及其初步应用

作     者：王威威 刘婷 陈果 姬忠华 赵增志 黄宇 陈艳艳 石梦雅 何秀苗 韦平 WANG Weiwei;LIU Ting;CHEN Guo;JI Zhonghua;ZHAO Zengzhi;HUANG Yu;CHEN Yanyan;SHI Mengya;HE Xiumiao;WEI Ping

作者机构：广西大学养禽与禽病学研究所广西南宁530005 广西民族大学海洋与生物技术学院/广西多糖材料与改良重点实验室广西南宁530006 

基　　金：国家自然科学基金(31660717,31560706) 2017广西科技重大专项(桂科AA17204057) 国家现代农业产业技术体系广西肉鸡产业创新团队建设专项(nycytxgxcxtd-19-03) 广西自然科学基金(2017GXNSFAA198033,2014GXNSFDA118018) 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2020年第52卷第5期

页      码：73-80页

摘      要：为获得传染性法氏囊病病毒(IBDV)特异性抗体检测用抗原VP2、VP1及VP2-VP1蛋白,分别设计引物扩增IBDV野毒株NN1172的VP2和VP1基因,并扩增VP2和VP1基因中抗原性和亲水性较好的重要区域,通过PCR扩增基因串联方法对截短的VP2和截短的VP1基因进行串联,首次获得VP2-VP1串联基因,并对VP2、VP1和VP2-VP1串联基因进行了原核表达和鉴定。结果成功构建了原核表达载体pET-VP2、pET-VP1和pET-VP2-VP1;诱导表达条件显示,3个重组质粒分别转入BL21菌株后经0.05 mmol/L IPTG诱导表达,分别得到分子量为69、114和63 kDa的VP2、VP1和VP2-VP1重组蛋白,且均以包涵体形式表达,3个重组蛋白分别于诱导后5、3和6 h时表达量最多。Western blot结果显示,表达的VP2、VP1和VP2-VP1蛋白与鸡抗IBDV阳性血清均具有良好的反应原性。以纯化的VP2、VP1和VP2-VP1蛋白作为包被抗原对传染性支气管炎病毒(IBV)、呼肠孤病毒(ReoV)、禽白血病病毒(ALV)和新城疫病毒(NDV)4种阳性血清检测均为阴性,表明所获得的纯化蛋白具有高度的特异性;对免疫了IBD灭活疫苗,IBD基因工程疫苗和IBD弱毒疫苗的商业鸡群进行抗体检测,结果均能显示疫苗免疫后机体抗体水平的变化趋势。本研究表明利用该原核表达系统所表达的3个蛋白均具有良好的免疫反应活性,为IBDV特异性抗体的检测和新型亚单位疫苗的研发奠定基础。

主 题 词：IBDV VP2基因 VP1基因 VP2-VP1串联基因 原核表达 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203922837...