严重急性呼吸综合征冠状病毒2假病毒的制备及验证

作     者：彭浩然 江亮亮 何燕华 肖爱军 唐海琳 戚中田 赵平 PENG Hao-ran;JIANG Liang-liang;HE Yan-hua;XIAO Ai-jun;TANG Hai-lin;QI Zhong-tian;ZHAO Ping

作者机构：海军军医大学(第二军医大学)海军医学系生物医学防护教研室上海200433 上海捷瑞生物工程有限公司上海201615 

基　　金：国家重点研发计划(2016YFC1200401) 国家科技重大专项(2017ZX10304403-003) 

出 版 物：《第二军医大学学报》 (Academic Journal of Second Military Medical University)

年 卷 期：2020年第41卷第4期

页      码：359-364页

摘      要：目的建立严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)假病毒(SARS-CoV-2 pps)的制备方法。方法设计、合成序列优化的SARS-CoV-2刺突蛋白(S)基因,构建表达质粒,转染293T细胞,用免疫荧光检测S蛋白的表达;将该质粒与基于慢病毒基因骨架的含增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的假病毒包装质粒共转染293T细胞,收集细胞培养上清,感染Vero E6和Huh7细胞,观察细胞内EGFP的表达;将制备的SARS-CoV-2 pps感染Vero E6细胞,检测膜融合抑制剂氯喹和盐酸阿比朵尔、SARS-CoV-2 S1蛋白单克隆抗体及新型冠状病毒肺炎患者恢复期血清对假病毒感染性的影响。结果构建的SARS-CoV-2 S质粒转染的293T细胞可与S1蛋白单克隆抗体及新型冠状病毒肺炎患者恢复期血清反应。SARS-CoV-2 S质粒与HIV假病毒包装质粒共转染293T细胞的上清加入Vero E6细胞和Huh7细胞36 h和72 h后可分别观察到细胞内表达的EGFP,EGFP阳性的Huh7细胞数量明显多于Vero E6细胞。2种膜融合抑制剂、1株人源S1单克隆抗体及2份新型冠状病毒肺炎患者恢复期血清均可有效抑制SARS-CoV-2 pps对Vero E6细胞的感染(P均<0.01)。结论成功制备了SARS-CoV-2 pps,其可用于后续抗SARS-CoV-2药物筛选与疫苗评价。

主 题 词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 假病毒 膜融合抑制剂 中和抗体 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.16781/j.0258-879x.2020.04.0359

馆 藏 号：203922895...