重组酶聚合酶扩增结合电化学DNA传感器检测日本血吸虫方法的建立

作     者：邓王平 徐斌 洪清华 王盛琳 吕超 李银龙 宋世平 陈军虎 许静 李石柱 胡薇 周晓农 DENG Wang-ping;XU Bin;HONG Qing-hua;WANG Sheng-lin;LV Chao;LI Yin-long;SONG Shi-ping;CHEN Jun-hu;XU Jing;LI Shi-zhu;HU Wei;ZHOU Xiao-nong

作者机构：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心世界卫生组织热带病合作中心科技部国家级热带病国际联合研究中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025 复旦大学生命科学学院微生物学与微生物工程系上海200043 中国科学院上海应用物理研究所上海201800 

基　　金：国家科技重大专项(No.2018ZX10101002-002,No.2018ZX10004222-004) 第60批中国博士后科学基金面上资助(No.2016M600111) 

出 版 物：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 (Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases)

年 卷 期：2020年第38卷第2期

页      码：168-174页

摘      要：目的联合重组酶聚合酶扩增及电化学DNA传感器检测技术,建立一种敏感、特异且简单的日本血吸虫(Schistosoma japonicum)核酸检测方法。方法提取日本血吸虫基因组DNA,以Sj R2基因片段为靶序列,设计重组酶聚合酶扩增(RPA)引物与探针,与电化学DNA传感器(EC)检测技术联合,将探针固定于多通道电极芯片进行界面RPA扩增及电化学检测,建立日本血吸虫核酸等温检测方法。优化RPA反应条件,通过检测10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-8ng日本血吸虫基因组DNA,评价RPA-EC方法的敏感性;通过检测10 ng日本血吸虫、埃及血吸虫、曼氏血吸虫、卫氏并殖吸虫、大片吸虫及华支睾吸虫的基因组DNA,评价RPA-EC方法的特异性。取10只6~8周龄C57成年小鼠,每鼠经腹部贴片感染40条日本血吸虫尾蚴,分别于感染前(0 d)和感染后7、21、35 d收集尾静脉血清,验证RPA-EC方法检测感染动物动态血清DNA中Sj R2基因片段的可行性。结果RPA-EC联合检测方法可在37℃、30 min内完成SjR2基因片段的界面快速扩增及检测,成虫基因组DNA的最低检出限可达10^-8ng,与曼氏血吸虫、埃及血吸虫、卫氏并殖吸虫、大片吸虫及华支睾吸虫基因组DNA无交叉反应,具有较好的特异性。日本血吸虫感染小鼠实验结果显示,RPA-EC联合检测方法可高敏感检出感染后7、21、35 d等不同感染期小鼠血清中的SjR2基因片段。结论本研究所建立的RPA-EC联合检测方法敏感性高、特异性好、操作简便,具有一定的应用前景。

主 题 词：日本血吸虫 重组酶聚合酶扩增 电化学DNA传感器 早期检测 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.12140/j.issn.1000-7423.2020.02.006

馆 藏 号：203924197...