亚砷酸钠对人肝星状细胞自噬分子LC3、Beclin-1蛋白表达的影响

作     者：惠瑜 孙立 袁艳杰 吴顺华 Hui Yu;Sun Li;Yuan Yanjie;Wu Shunhua

作者机构：新疆医科大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学教研室乌鲁木齐830011 

基　　金：国家自然科学基金(81660523) 新疆维吾尔自治区自然科学基金(2017D01C192) 

出 版 物：《中华地方病学杂志》 (Chinese Journal of Endemiology)

年 卷 期：2020年第39卷第1期

页      码：10-15页

摘      要：目的研究亚砷酸钠(NaAsO2)对人肝星状细胞(LX-2细胞)自噬蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)、Beclin-1的影响。方法体外培养LX-2细胞,使用红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-LC3(RFP-GFP-LC3)慢病毒稳定感染LX-2细胞,流式细胞术进行筛选和感染率测定。采用成组设计,用不同浓度NaAsO2[μmol/L:5.00(感染+高砷剂量组)、0.50(感染+中砷剂量组)、0.05(感染+低砷剂量组)、0.00(感染组)]孵育稳定感染LX-2细胞,构建体外肝纤维化模型,同时设立空白组。采用CCK-8法检测NaAsO2对LX-2细胞活性的影响;采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测LC3、Beclin-1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白表达水平。结果RFP-GFP-LC3慢病毒稳定感染LX-2细胞后,流式细胞术测定RFP、GFP荧光,感染率在70%左右,荧光显微镜下观测RFP和GFP的荧光强度无显著性差异,稳定感染细胞株建立成功。NaAsO2处理24、48、72 h,与空白组比较,感染组细胞活性差异无统计学意义(P均>0.05),其余各剂量组细胞活性均下降(P均<0.05)。各组间LC3、Beclin-1、α-SMA mRNA和蛋白表达水平比较差异有统计学意义(F=17.450、11.084,11.294、11.745,31.635、12.130,P均<0.05)。LC3 mRNA水平,感染组、感染+高砷剂量组、感染+低砷剂量组(20.09±6.50、36.57±9.68、14.19±6.17)高于空白组(1.25±0.21,P均<0.05),感染+高砷剂量组高于感染组(P<0.05);Beclin-1 mRNA水平,各组(22.46±0.66、13.38±2.27、20.80±6.95、24.31±7.09)高于空白组(1.10±0.53,P均<0.05);α-SMA mRNA水平,感染+高砷剂量组、感染+中砷剂量组、感染+低砷剂量组(1.07±0.27、1.65±0.17、1.73±0.26)高于空白组(0.60±0.11)、感染组(0.31±0.09,P均<0.05)。LC3蛋白表达,感染组、感染+中砷剂量组、感染+低砷剂量组(0.20±0.06、0.15±0.00、0.16±0.01)高于空白组(0.04±0.01,P均<0.05);Beclin-1蛋白表达,感染+中砷剂量组、感染+低砷剂量组(0.83±0.03、1.20±0.02)高于空白组(0.25±0.01,P均<0.05),感染+低砷剂量组高于感染组(0.53±0.03,P<0.05);α-SMA蛋白表达,感染+中砷剂量组、感染+低砷剂量组(0.78±0.10、0.68±0.06)高于空白组(0.40±0.07)、感染组(0.48±0.04,P均<0.05)。结论NaAsO2可能通过促进LX-2细胞自噬水平影响砷致肝纤维化过程。

主 题 词：亚砷酸盐类 肝星状细胞 自噬 肝纤维化 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.2095-4255.2020.01.003

馆 藏 号：203924231...