Livin shRNA稳定转染Hep-2细胞系的建立

作     者：邓文婷 王双乐 温国封 李创伟 DENG Wenting;WANG Shuangle;WEN Guofeng;LI Chuangwei

作者机构：中山大学附属汕头医院耳鼻咽喉头颈外科广东汕头515031 广州军区广州总医院耳鼻咽喉头颈外科广东广州510010 

出 版 物：《中国耳鼻咽喉头颈外科》 (Chinese Archives of Otolaryngology-Head and Neck Surgery)

年 卷 期：2013年第20卷第11期

页      码：583-586页

摘      要：目的构建靶向Livin基因干扰真核表达质粒,建立干扰质粒稳定转染的Hep-2细胞系,下调Livin基因在Hep-2细胞系中的表达。方法针对Livin基因的mRNA序列设计干扰序列,分别构建1个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒,大肠杆菌扩增、酶切及测序鉴定,用脂质体介导转染Hep-2细胞,经G418筛选出稳定转染的细胞系,用Real-time PCR和Western blot检测Livin在mRNA和蛋白水平的抑制效果。结果经测序证实成功构建pGenesil-Livin shRNA真核表达质粒。干扰质粒稳定转染的Hep-2细胞在荧光显微镜下观察,发出绿色荧光。重组质粒转染Hep-2细胞后,Livin基因在mRNA及蛋白水平明显下降,mRNA水平下调47.17%,蛋白水平下调34.25%。结论成功构建以Livin为靶向的Livin shRNA真核表达质粒。对喉癌Hep-2细胞中Livin的表达具有显著抑制效应,为研究Livin在Hep-2中的功能和喉癌的基因治疗奠定了基础。

主 题 词：凋亡调节蛋白质类 细胞 培养的 RNA干扰 Livin基因 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.16066/j.1672-7002.2013.11.004

馆 藏 号：203925059...