E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究

作     者：吕慧 赵蔚明 于修平 郑燕 王红 周亚滨 齐眉 于晗 杨熙 L(U) Hui;ZHAO Wei-ming;YU Xiu-ping;ZHENG Yan;WANG Hong;ZHOU Ya-bin;QI Mei;YU Han;YANG Xi

作者机构：山东大学医学院微生物学教研室山东济南250012 加拿大曼尼托巴大学医学微生物系 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30271193) 国家自然科学基金对外交流与合作项目(30310403165) 山东省自然科学基金资助项目(Y2002004) 

出 版 物：《山东大学学报（医学版）》 (Journal of Shandong University:Health Sciences)

年 卷 期：2006年第44卷第12期

页      码：1189-1193页

摘      要：目的:构建E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)基因重组腺病毒,为沙眼衣原体腺病毒疫苗的研究奠定基础。方法:根据Genebank中E型Ct MOMP基因序列设计引物,用高保真PCR方法从E型Ct基因组DNA中扩增得到MOMP基因片段,克隆至pcDNAII载体,测序后连接入腺病毒穿梭载体pDC316。穿梭载体pDC316-MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至HEK293细胞,在Cre-loxP重组酶作用下进行重组,包装成重组腺病毒颗粒,用PCR和RT-PCR方法进行鉴定。并用动物免疫试验检测重组腺病毒的免疫原性。结果:从E型Ct基因组DNA中扩增出约1.1 kb的特异MOMP基因片段,酶切鉴定及DNA序列测定证实穿梭载体pDC316-MOMP构建正确。穿梭载体pDC316-MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至293细胞,出现明显细胞病变效应。收集重组腺病毒,PCR法证实重组腺病毒含有MOMP基因,RT-PCR证实重组腺病毒在293细胞能表达MOMP基因。重组腺病毒免疫小鼠可诱导特异性抗体产生,证明重组腺病毒具有良好免疫原性。结论:成功构建了E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒,该重组腺病毒可诱导小鼠产生特异性抗体。

主 题 词：衣原体 沙眼 重组腺病毒 基因 Major outer membrane protein 小鼠 近交BALB C 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071008[071008] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-7554.2006.12.001

馆 藏 号：203926431...