rhIL-13在毕氏酵母中的表达及生物学活性研究

作     者：江阳 黄伟达 时宏珍 张维延 周璇 张学光 JIANG Yang 1,HUANG Wei-da 2,SHI Hong-zhen 1 ,et al (1.Department of Immunology,Suzhou University ,Suzhou 215007,China;2.Laboratory of Biochemistry & Molecular Biology,Fudan University ,Shanghai 200433,China)

作者机构：苏州大学免疫学研究室苏州215007 复旦大学生命科学院生物化学和分子生物学实验室上海200433 

基　　金：国家自然科学基金资助题!( 3 9870 82 5 ) 江苏省科委自然科学基金重点项目资助!( 13 19810 0 ) 

出 版 物：《苏州医学院学报》 (Acta Academiae Medicinae Suzhou)

年 卷 期：2001年第21卷第2期

页      码：117-120页

摘      要：目的　在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达重组人白介素 - 13(rhIL - 13) ,便于进一步研究开发。方法　根据酵母对密码子的偏爱性设计并人工合成了人IL - 13编码基因片段 ,经T4DNA连接酶、PCR技术连接形成IL - 13cDNA全长序列 ;将其插入 pPICZαA质粒中 ,构建成 pPICZαA -IL - 13表达载体 ;该载体经SacI线形化后以电转化法导入GS115酵母菌株中 ,经YPD平板Zeocine抗性筛选获得IL - 13表达阳性菌株 ;用WesternBlotting和ELISA检测发酵上清中IL - 13的抗原性和表达量 ,B9-11细胞株分析其生物学活性。结果　15 %SDS -PAGE显示重组人IL - 13分子量约 13kd ,Western -blotting证实为人IL - 13,ELISA测定在摇瓶培养上清表达量达 15 μg/ml,其生物学活性同标准品一样具有剂量依赖性的刺激B9-11细胞株增殖的作用。结论　成功获得IL - 13人工基因和稳定分泌蛋白的基因工程菌株 ,该重组蛋白的生物学活性达到标准品的要求。

主 题 词：rhIL-13 毕氏酵母 生物学活性 基因表达 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-0399.2001.02.003

馆 藏 号：203926677...