单纯疱疹病毒2型ICP4基因荧光实时定量PCR检测方法的建立

作     者：刘继峰 关翠萍 唐旭 徐田红 许爱娥 Liu Jifeng;Guan Cuiping;Tang Xu;Xu Tianhong;Xu Aie

作者机构：浙江省杭州市第三人民医院皮肤科310009 

基　　金：浙江省自然科学基金项目(Y204510) 

出 版 物：《医学研究杂志》 (Journal of Medical Research)

年 卷 期：2008年第37卷第12期

页      码：36-38页

摘      要：目的建立实时荧光PCR定量检测单纯疱疹病毒2型(HSV2)ICP4基因的方法。方法依据HSV2ICP4基因序列设计引物,PCR纯化后克隆到pMD-18T载体上进行测序,抽提重组质粒作为标准品。根据测序结果设计荧光定量PCR的引物和探针,质粒标准品10倍稀释后进行扩增,建立标准曲线,并进行灵敏度和可靠性分析。结果测序结果显示在扩增的PCR片段中有在A-G无和T-C的无义突变。标准品101以下没有检测信号,101具有明确的检测信号,因而检测的灵敏度为10。可靠性测定结果:107～101进行10次重复Ct值的平均值分别为14.275±0.137、17.988±0.162、22.081±0.259、25.957±0.345、29.565±0.203、33.269±0.287、37.737±0.698,变异系数分别为0.965%、0.902%、1.174%、1.329%、0.686%、0.862%、1.851%。Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系。回归系数为0.998。结论成功建立了HSV2ICP4基因实时定量荧光PCR检测的方法,灵敏度高,重复性好,可用于HSV2ICP4基因的定量分析。

主 题 词：单纯疱疹病毒2型 ICP4 实时定量荧光PCR 标准曲线 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 100206[100206] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-548X.2008.12.014

馆 藏 号：203927312...