马疱疹病毒1型QuantStudio^TM 3D数字PCR检测方法的建立

作     者：雷程红 陈凯云 徐新峰 胡都斯·艾尔肯 徐军 白梅花 史茜 肖媛媛 王科珂 LEI Chenghong;CHEN Kaiyun;XU Xinfeng;HUDUSI·Aierken;XU Jun;BAI Meihua;SHI Qian;XIAO Yuanyuan;WANG Keke

作者机构：新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 乌鲁木齐海关技术中心乌鲁木齐830063 

基　　金：2018海关总署科研计划项目(2018IK063) 2019海关总署科研计划项目(2019HK049) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2020年第47卷第5期

页      码：1299-1306页

摘      要：试验旨在建立一种高灵敏性的马疱疹病毒1(EHV-1)3D数字PCR(3D-dPCR)检测方法,对EHV-1病毒含量较低的样品能准确定量检出,实现马鼻肺炎早期诊断及预防。根据EHV-1糖蛋白B基因保守区域设计特异性引物和探针,优化3D-dPCR反应体系中引物探针浓度和退火温度,对该方法进行灵敏性、特异性、重复性分析,建立了EHV-1的3D-dPCR方法。本研究建立的3D-dPCR方法,引物和探针最佳浓度分别为0.4和0.4μmol/L,最佳退火温度为60℃,该方法绝对定量曲线的R2=0.998,线性关系良好,与实时荧光定量PCR方法相比灵敏度高10倍左右,最低检出限为5.83拷贝/μL;批内和批间重复性试验变异系数均<3.2%;与EHV-4、马泰勒虫、马病毒性动脉炎的核酸无交叉反应;通过对123份临床样品进行3D-dPCR检测,结果显示,3D-dPCR方法阳性检出率为66.7%,高于世界动物卫生组织(OIE)中EHV-1的实时荧光定量PCR方法阳性检出率64.2%。3D-dPCR方法对病毒含量较高的样品与实时荧光定量PCR结果一致,对病毒含量较低的样品敏感性更高,能有效检出可疑样品。本试验结果表明,建立的3D-dPCR方法检测低拷贝数的临床样品时灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于EHV-1的准确定量检测。

主 题 词：马疱疹病毒1型(EHV-1) 3D数字PCR(3D-dPCR) 绝对定量 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16431/j.cnki.1671-7236.2020.05.002

馆 藏 号：203927840...