鹦鹉幼稚病PCR诊断方法的建立与应用

作     者：朱小甫 吴旭锦 张文娟 熊忙利 邢蕾 ZHU Xiao-fu;WU Xu-jin;ZHANG Wen-juan;XIONG Mang-li

作者机构：咸阳职业技术学院畜牧兽医研究所动物疫病分子生物学诊断实验室陕西咸阳712000 

基　　金：咸阳市科学技术研究计划项目(2018k02-56) 西安市科学技术研究计划项目(20193036YF024NS024) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2020年第41卷第5期

页      码：19-24页

摘      要：建立一种鹦鹉幼稚病(BFD)PCR诊断方法,为临床快速确诊鹦鹉幼稚病提供技术手段。参考GenBank中公开的BFDV基因组序列,设计了2对用于阳性质粒构建引物和1对检测引物,采用套式PCR从临床疑似病料中扩增BFDV VP1基因,构建VP1基因阳性质粒,以阳性质粒为模板,优化检测引物扩增体系与条件,进行灵敏度试验、特异性检测和临床样品检测,挑选3份不同地区阳性样品测序验证。结果显示,成功构建了BFDV VP1基因阳性质粒pGEM-T-VP1,建立的PCR检测方法检测下限为105.8copies/μL。用该方法检测时仅能以pGEM-T-VP1为模板扩增到目的条带,检测5种常见禽病毒均为阴性。应用建立的方法对75份疑似病料进行检测,结果19份为阳性,阳性率为25.3%。测定了3株不同地区BFDV流行毒株VP1基因片段序列,比对分析发现核苷酸序列同源性为99.4%~100%,在基因进化树上这3株病毒处在一个独立的分支上,显示出一定的地域特征。成功建立了一种灵敏度高、特异性好的BFD PCR诊断方法,应用于临床诊断显示出良好效果。

主 题 词：鹦鹉幼稚病 PCR诊断 多瘤病毒 序列分析 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16437/j.cnki.1007-5038.2020.05.004

馆 藏 号：203930199...