鹦鹉禽多瘤病毒陕西株VP1基因的克隆及荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：刘艳 张靖飞 陈跃飞 胡伟 王峰 王慎涛 田凯歌 王晶钰 LIU Yan;Zhang Jing-fei;CHEN Yue-fei;HuWei;WANG Feng;WANG Shen-tao;TIAN Kai-ge;WANG Jing-yu

作者机构：西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 贵阳市动物疫病预防控制中心贵州贵阳550081 西安市动物疫病预防控制中心陕西西安710000 西安市长安区动物疾病预防控制中心陕西西安710000 西安市临潼区动物疾病预防控制中心陕西西安710600 

基　　金：陕西省资源主导型产业关键技术(链)项目-农业领域项目(2015KTCL02-16) 2018科技成果推广-多学科产业服务与国际合作项目(00500/Z222021811) 西安市科学科技局农业科技创新工程项目(201806115YF03NC11-1) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2020年第42卷第4期

页      码：371-376页

摘      要：为了解鹦鹉禽多瘤病毒(APV)陕西分离株(SX-2018株)VP1基因的分子特征,并建立可用于临床的快速灵敏的APV检测方法,本研究通过PCR扩增了SX-2018株VP1基因序列,并与22株国内外参考株进行了核苷酸同源性比较和遗传进化分析。结果显示:扩增的SX-2018株VP1基因全长为1032 bp,与其他APV分离株核苷酸相似度为99.1%~100.0%;遗传进化分析显示SX-2018株属于CladeⅡ分支。设计针对VP1基因的特异性引物(209 bp)并构建其相应的质粒标准品,以不同浓度的该质粒标准品为模板扩增并绘制了标准曲线,通过条件优化建立了APV SYBR Green荧光定量PCR检测方法。结果显示:建立的荧光定量PCR方法仅特异性扩增APV,与鹦鹉其它常见病毒无交叉反应,特异性强;对质粒标准品检测的最低浓度达5.4×101拷贝/μL,为常规PCR的100倍;组内组间变异系数分别小于0.5%、1.5%,重复性好。利用该方法与常规PCR方法对疑似APV感染的30份样品进行检测并比较,结果显示:建立的APV SYBR Green荧光定量PCR检测方法与常规PCR的符合率为86.67%,且阳性检出率高于常规PCR。本研究为我国鹦鹉APV的分子流行病学调查提供了参考数据,为在鹦鹉群中开展该病的筛查提供了有效的技术手段。

主 题 词：禽多瘤病毒 荧光定量PCR 检测 鹦鹉 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.201908022

馆 藏 号：203930579...