2型猪链球菌酪氨酸激酶基因的原核表达及表达产物抗血清的制备

作     者：张会芳 吴倩倩 王悄悄 王晶 胡丹 郑峰 汪春晖 潘秀珍 曹祥荣 ZHANG Hui-fang;WU Qian-qian;WANG Qiaoqiao;WANG Jing;HU Dan;ZHENG Feng;PAN Xui-zhen;CAO Xiang-rong

作者机构：南京师范大学生命科学学院江苏南京210023 东部战区疾病预防控制中心 南京医科大学附属无锡妇幼保健院 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81571965,81701635) 江苏省自然科学基金项目(No.BK20151019) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2020年第15卷第2期

页      码：136-140页

摘      要：目的制备2型猪链球菌(Streptococcus suis 2)酪氨酸激酶Cps2C重组蛋白及其抗血清,为进一步研究Cps2C的作用奠定基础。方法采用在线工具对cps2C基因进行生物信息学分析。设计cps2C基因引物,以05ZYH33菌株基因组DNA为模板PCR扩增cps2C基因,构建pET32a:cps2C重组质粒;重组质粒转入感受态*** BL21后,IPTG诱导表达Cps2C重组蛋白,经Ni2+亲和层析纯化后用His单克隆抗体进行鉴定。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,获得多克隆抗血清,采用间接ELISA法测定抗体效价。结果成功构建pET32a:cps2C表达质粒,获得阳性*** BL21Cps2C重组蛋白表达菌株,SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白条带单一,相对分子质量为43×103,与预期一致;Western blot检测Cps2C重组蛋白可以与His单克隆抗体、感染05ZYH33全菌的猪恢复期血清反应。制备的多克隆抗血清效价为1∶819 200,且能与重组蛋白反应。结论原核表达了具有抗原性的Cps2C重组蛋白,制备的鼠源多抗血清能识别Cps2C蛋白,为研究Cps2C蛋白在2型猪链球菌中的作用奠定了基础。

主 题 词：2型猪链球菌 原核表达 酪氨酸激酶 多抗血清 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13350/j.cjpb.200203

馆 藏 号：203930920...