靶向人端粒酶逆转录酶基因小片段干涉RNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

作     者：赵鹏 傅震 尤永平 王存祖 陈云祥 陆小明 鲁艾林 刘宁 ZHAO Peng;FU Zheng;YOU Yong-ping;WANG Cun-zu;CHENG Yun-xiang;LU Xiao-ming;LU Ai-lin;LIU Ning

作者机构：南京医科大学附属第一医院神经外科211029 

基　　金：江苏省自然科学基金创新人才项目(BK2004428) 

出 版 物：《中华医学遗传学杂志》 (Chinese Journal of Medical Genetics)

年 卷 期：2008年第25卷第1期

页      码：27-31页

摘      要：目的通过构建靶向人端粒酶催化亚基人端粒酶逆转录酶基因（human telomerase reverse transcriptase,hTERT）RNA干涉（RNA interference，RNAi）慢病毒载体，获得可供转染的滴度，为进一步研究该基因缺陷在真核细胞中的影响提供物质基础。方法根据hTERT设计的两条互补的单链寡核苷酸退火后形成双链插入到pLVTHM质粒，生成含RNAi盒的载体，然后与pCMV—dR8．74和pMD2G病毒包装所必须的元件经脂质体导入T293细胞，包装成慢病毒，收集上清浓缩病毒并检测其滴度。所得病毒感染U87胶质瘤细胞，逆转录PCR和端粒重复序列扩增法（telomeric repeat amplification protocol, TRAP）检测干扰后细胞内hTERT表达变化及端粒酶表达变化，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果将目的序列成功连接到载体上，并经测序分析证实载体构建成功；成功包装成高滴度的慢病毒。逆转录PER和TRAP检测结果证实构建的hTERT-小片段干涉RNARNA （small interference RNA,siRNA）慢病毒表达载体可显著抑制hTERT基因的表达和端粒酶活性并导致细胞凋亡。结论成功构建了携带靶向hTERT基因的RNAi慢病毒载体。该载体能够有效抑制hTERT的表达和端粒酶活性并导致细胞凋亡，为以hTERT为靶点的胶质瘤基因治疗的后续研究奠定基础。

主 题 词：慢病毒 人端粒酶逆转录酶基因 RNA干涉 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1003-9406.2008.01.007

馆 藏 号：203932581...