大鼠永生化神经前体细胞CDH1小干扰RNA真核载体的构建

作     者：姚文龙 张传汉 柳璐 祝畅 邱瑾 桂伶俐 田玉科 YAO Wen-long;ZHANG Chuan-han;LIU Lu

作者机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科武汉市430030 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30571788) 

出 版 物：《中华麻醉学杂志》 (Chinese Journal of Anesthesiology)

年 卷 期：2008年第28卷第10期

页      码：919-921页

摘      要：目的构建大鼠永生化神经前体细胞（INPC）CDH1小干扰RNA（siRNA）真核载体。方法根据大鼠CDH1基因的编码序列设计3个小发夹RNA（shRNA）干扰序列及1个阴性对照序列，根据pENTR／H1／TO中间载体说明书设计并合成相应的DNA单链，退火后分别连接到pENTR／H1／TO线性载体上，形成完整载体，提取CDH1 siRNA真核载体后（分别为CDH1 siRNA1、CDH1 siRNA2、CDH1 siRNA3和CDH1 siRNA对照），进行DNA测序鉴定。采用Lipofectamine 2000法，分别将成功构建的CDH1 siRNA真核载体转染大鼠INPC，于转染24h和48h时计算INPC转染效率=INPC成功转染数／细胞总数，于转染48h时提取细胞总RNA，采用实时定量PCR法检测INPC CDH1 mRNA的表达。结果经DNA测序鉴定构建的3个CDH1 siRNA真核载体和1个阴性对照载体所插入的RNA干扰序列均正确，无碱基突变或缺失；INPC转染24h与48h时转染效率分别为（54±5）％和（36±4）％；CDH1 sinNA2转染INPC 48h时INPC CDH1 mRNA表达水平较CDH1 siRNA3降低，且两者均低于CDH1 siRNA1（P〈0．05）。结论本研究成功构建大鼠INPC CDH1 siRNA真核载体。

主 题 词：细胞周期末期促进复合物 RNA,小干扰 干细胞 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:0254-1416.2008.10.022

馆 藏 号：203932822...