SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线鉴定鸟分枝杆菌方法的建立及初步应用

作     者：王赛赛 潘丽萍 姜广路 李自慧 贾红彦 孙琦 张宗德 刘洋 WANG Saisai;PAN Liping;JIANG Guanglu;LI Zihui;JIA Hongyan;SUN Qi;ZHANG Zongde;LIU Yang

作者机构：首都医科大学附属北京胸科医院&北京市结核病胸部肿瘤研究所流行病学研究室北京101149 首都医科大学附属北京胸科医院&北京市结核病胸部肿瘤研究所耐药结核病研究北京市重点实验室北京101149 首都医科大学附属北京胸科医院&北京市结核病胸部肿瘤研究所国家结核病临床实验室北京101149 

基　　金：国家自然科学基金(81902024) “十二五”国家科技重大专项(2015ZX10004801-003,2017ZX10201301-004) 北京市自然科学基金(7192038) 北京市医管局登峰人才项目(DFL20181601) 通州区运河人才计划(YH201807,YH201921) 

出 版 物：《临床检验杂志》 (Chinese Journal of Clinical Laboratory Science)

年 卷 期：2020年第38卷第4期

页      码：251-257页

摘      要：目的基于SYBR GreenⅠ荧光染料建立鉴定鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium,MA)的荧光PCR熔解曲线法,为临床鉴定MA提供简单、准确性高的分子生物学检测方法。方法以MA的特异性插入序列IS1311为检测靶标设计引物,在60℃的退火温度下,建立鉴定MA的SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法,并对MA等21种分枝杆菌标准株和金黄色葡萄球菌等5种常见致病菌进行检测,评价方法的特异性、检测限;以hsp65、16S rDNA普通PCR扩增产物测序分析为“金标准”,鉴定200株分枝杆菌临床分离株,评估建立方法鉴定MA的准确性。结果SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法在30个循环内能准确鉴定出21种分枝杆菌标准株和5种致病菌中的MA,检测限为5.6×10-2 ng/μL。200株分枝杆菌临床分离株中,以PCR测序鉴定出16株MA和184株其他分枝杆菌,以SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法鉴定出15株MA和185株非MA;本研究建立的方法和测序方法对MA的鉴定率差异无统计学意义(P>0.05);两法符合率为99.5%(199/200),一致性较高(Kappa值>0.75,P<0.01);建立方法的敏感性为93.8%(15/16),特异性为100.0%(184/184),阳性预测值为100.0%(15/15),阴性预测值为99.5%(184/185)。结论以MA特异性重复序列IS1311为基础建立的SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法,具有较高的灵敏度和特异性,为MA的临床检测提供新的途径。

主 题 词：鸟分枝杆菌 SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线 测序 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.13602/j.cnki.jcls.2020.04.04

馆 藏 号：203932918...