人类乳头瘤病毒16 E7真核表达载体构建及对A431皮肤鳞癌细胞增殖和侵袭的影响

作     者：李颖 何威 张斌 吴军 王儒鹏 林自华 LI Ying;HE Wei;ZHANG Bin;WU Jun;WANG Ru-peng;LIN Zi-hua

作者机构：第三军医大学新桥医院皮肤科重庆400037 

基　　金：第三军医大学新桥医院"1520"人才基金(2006)~~ 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2009年第31卷第9期

页      码：818-821页

摘      要：目的构建HPV16 E7(E7)真核表达载体,观察E7过表达对A431细胞增殖和侵袭的影响。方法从Caski细胞中抽提总RNA,针对E7序列设计特异引物,进行逆转录和聚合酶链式反应扩增得到E7cDNA。应用基因工程方法将得到的PCR片段克隆至真核表达载体pEGFP-N1的多克隆位点。重组质粒经双酶切鉴定和测序后,使用LipofectamineTM 2000转染A431细胞。Western blot检测E7在细胞中的表达。WST-1和Transwell系统分别检测细胞增殖和侵袭能力。流式细胞术检测转染前后细胞周期的变化。ELISA检测TGF-β分泌情况。结果经酶切、测序鉴定,E7基因正确插入到pEGFP-N1多克隆位点,获得pEGFP-E7;Western blot检测结果显示:与未转染组相比,转染组E7蛋白高表达。过表达E7的A431细胞增殖和侵袭能力均显著增强,细胞周期中S期细胞数量增多,G1期细胞数量相对减少。TGF-β分泌增多。结论E7过表达可改变细胞周期,提高皮肤鳞癌细胞的增殖和侵袭能力,而分泌增多的TGF-β并不能抑制肿瘤的增殖和侵袭。

主 题 词：HPV16 E7 A431皮肤鳞癌细胞 表达载体 增殖 侵袭 TGF-β 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 11[军事学] 07[理学] 071007[071007] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-5404.2009.09.015

馆 藏 号：203933126...