大鼠OSP-1启动子克隆与表达检测

作     者：于今非 李明鸿 谢琴 刘庆友 石德顺 

作者机构：广西大学动物繁殖研究所广西南宁530005 

基　　金：农业部转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX08007-003)资助 

出 版 物：《安徽农业科学》 (Journal of Anhui Agricultural Sciences)

年 卷 期：2010年第38卷第24期

页      码：13190-13192,13202页

摘      要：[目的]克隆大鼠卵巢特异性启动子(OSP-1)片段,并在细胞水平检测该启动子调控标记基因的组织特异性表达。[方法]参考已知大鼠OSP-1序列设计特异性引物,PCR扩增大鼠OSP-1启动子片段并与已公布的大鼠OSP-1序列进行比较。将OSP-1启动子定向克隆到去除CMV的pEGFP-N1载体,构建真核表达载体pOSP-1-EGFP-N1;重组质粒在脂质体LipofectamineTM2000介导下,分别转染水牛的颗粒细胞、乳腺上皮细胞和胎儿成纤维细胞,并于转染后12,24和48h在荧光显微镜下观察EGFP表达情况。[结果]OSP-1启动子扩增片段长480bp,与已公布的大鼠OSP-1序列的相似性达96%;应用启动子预测软件对所得序列分析表明,该扩增片段含有类似于TA-TAbox和CAATbox的核心启动顺式元件,并含有多个C/EBPbeta转录因子的结合位点;在颗粒细胞转染后12h可观测到绿色荧光表达,转染后24h荧光细胞增多,细胞形态均呈圆形、体积较大,48h荧光细胞数量骤减,且死细胞增多;在乳腺上皮细胞和胎儿成纤维细胞均未检测到EGFP基因表达。[结论]大鼠OSP-1启动子控制下的EGFP基因可在水牛颗粒细胞中特异表达,为构建水牛卵巢特异性表达转基因载体奠定了基础。

主 题 词：OSP-1启动子 水牛 卵巢特异表达 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0517-6611.2010.24.102

馆 藏 号：203933733...