1种简单快速高效的双靶点CRISPR/Cas9载体构建方法

作     者：张扬 黄维峰 周菲 林拥军 ZHANG Yang;HUANG Weifeng;ZHOU Fei;LIN Yongjun

作者机构：华中农业大学生命科学技术学院/作物遗传改良国家重点实验室武汉430070 

基　　金：国家重大科技专项(2016ZX08001-001) 

出 版 物：《华中农业大学学报》 (Journal of Huazhong Agricultural University)

年 卷 期：2020年第39卷第3期

页      码：9-18页

摘      要：基于Golden Gate载体构建过程,对CRISPR/Cas9双靶点敲除技术的载体构建系统进行了优化,建立了一种简单快速高效且无PCR扩增的双靶点CRISPR/Cas9载体构建方法。在本方法中,只需将设计好的2个靶点DNA小片段和1个外源片段用T4 DNA连接酶构建到CRISPR/Cas9载体上即可。用本方法对10个已报道的水稻基因构建了20个双靶点CRISPR/Cas9载体,阳性率为100%,测序结果显示无突变。该载体系统非常适合大批量CRISPR/Cas9载体的构建,同时也为其他植物中构建双靶点CRISPR/Cas9载体提供借鉴。

主 题 词：水稻 CRISPR/Cas9 基因敲除 基因编辑 双靶点 载体构建 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13300/j.cnki.hnlkxb.2020.03.002

馆 藏 号：203934428...