菠萝AcPIP1∶2基因的克隆和重组载体的构建

作     者：王芳 黄娟 董乐 陈明贤 刘宝 邱吕萍 陈月钗 WANG Fang;HUANG Juan;DONG Le;CHEN Mingxian;LIU Bao;QIU Lüping;CHEN Yuechai

作者机构：泉州师范学院海洋与食品学院福建泉州362000 泉州市农业科学研究所福建泉州362212 东北师范大学分子表观遗传学教育部重点实验室吉林长春130024 

基　　金：泉州师范学院国家级和各部委项目预研基金(2016YYKJ17) 

出 版 物：《泉州师范学院学报》 (Journal of Quanzhou Normal University)

年 卷 期：2020年第38卷第2期

页      码：17-23页

摘      要：构建菠萝(Ananas comosus(Linn.) Merr.)质膜水通道蛋白基因(AcPIP1∶2)原核表达载体和体外转录载体,为制备AcPIP1∶2抗体和含有Poly(A)+的AcPIP1∶2转录子奠定基础.以菠萝果实为试验材料,提取总RNA并反转录成cDNA.以cDNA为模板,根据GenBank中公布的AcPIP1∶2全长cDNA序列(登录号:XM020229679.1)设计合成特异性引物进行PCR扩增,获得AcPIP1∶2开放阅读框(ORF)序列.序列分析表明,获得的AcPIP1∶2序列与GenBank中公布的序列一致,序列长度为867 bp.该序列经Hind III和Xho I双酶切后亚克隆至原核表达载体pET32a(+),酶切、测序表明,成功构建了重组载体pET32a(+)-AcPIP1∶2.将pET32a(+)-AcPIP1∶2转到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中表达,结果表明,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生分子量为50 ku的融合蛋白.该序列经Hind III和Xba I双酶切后亚克隆至载体pSP64 Poly(A)中,酶切、测序表明,成功构建了重组载体pSP64 Poly(A)-AcPIP1∶2.

主 题 词：菠萝 质膜水通道蛋白 载体构建 原核表达 体外转录 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.16125/j.cnki.1009-8224.2020.02.003

馆 藏 号：203934429...