重叠延伸PCR合成风疹病毒E1蛋白抗原肽基因及其表达

作     者：芦春斌 邱建阁 马贞丽 

作者机构：暨南大学生命科学技术学院广东广州510632 

基　　金：广东省科技计划项目国际合作项目(2009B050700030) 广东省科技计划社会发展项目(2010B031600108) 2011年广东省教育部产学研结合项目(2011B090400155) 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2012年第28卷第8期

页      码：830-833页

摘      要：目的:利用重叠延伸PCR合成风疹病毒E1基因的抗原肽段,构建其原核表达载体并表达蛋白,为进一步获得高质量的rE1重组抗原肽奠定基础。方法:利用软件对风疹病毒E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码子进行优化;设计多对寡核苷酸引物,以重叠延伸PCR法合成相应抗原肽段,克隆后测序鉴定。再以酶切连接的方法将合成的抗原肽序列克隆导入原核表达载体pET32a;利用IPTG诱导抗原肽段的表达,SDS-PAGE和West-ern blot法分析表达产物。结果:经过6轮重叠延伸PCR扩增,成功获得与预期目的序列一致的风疹病毒E1基因抗原肽并构建获得重组质粒pET32-rE1;在37℃下分别以终浓度为1 mmol/L和0.5 mmol/L的IPTG诱导抗原肽表达,SDS-PAGE和Western blot法检测到预期的蛋白条带;且以IPTG终浓度为1 mmol/L诱导6 h后表达量最高。结论:成功合成了密码子优化的风疹病毒E1基因抗原肽段,构建其原核表达载体pET32-rE1并表达该抗原肽。

主 题 词：风疹病毒E1基因 抗原肽 重叠延伸PCR 密码子优化 原核表达 

学科分类：07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 090102[090102] 0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13423/j.cnki.cjcmi.006506

馆 藏 号：203934607...