环介导等温扩增技术检测产气荚膜梭菌α毒素方法的建立及应用

作     者：王朋冲 潘奕帆 许大伟 尚宵敏 姜艳芬 WANG Peng-chong;PAN Yi-fan;XU Da-wei;SHANG Xiao-min;JIANG Yan-fen

作者机构：西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学食品科学与工程学院陕两杨凌712100 内蒙古自治区动物监督所内蒙古呼和浩特010000 

基　　金：“十三五”国家重点研发计划资助项目(2018YFD0500500) 陕西省农业科技创新与攻关资助项目(2015NY171) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2020年第40卷第5期

页      码：953-959页

摘      要：建立快速检测产气荚膜梭菌的环介导等温扩增(LAMP)方法。针对GenBank发布的产气荚膜梭菌α毒素基因序列,应用Primer explorer V5软件在线设计了LAMP引物。通过对扩增条件包括反应时间、反应温度、Mg^2+浓度、dNTPs浓度、内外引物浓度比、Bst DNA聚合酶浓度进行优化,建立了产气荚膜梭菌LAMP检测方法。特异性试验显示除产气荚膜梭菌外其他细菌检测结果均为阴性,灵敏度试验显示LAMP方法对该菌DNA最低检测量为10 ng/L,菌液的最低检出量为3.7×10^1 CFU/mL,分别是PCR方法的100倍和10倍。用建立的LAMP方法对牛粪便、饲料和饮水共计102份样品进行检测,产气荚膜梭菌阳性率为19.61%(20/102),与PCR检测及细菌分离鉴定结果一致,且样品增菌时间缩短2~4 h。本试验成功建立了快速、灵敏、特异、操作简便和结果可视的产气荚膜梭菌的LAMP检测方法。

主 题 词：产气荚膜梭菌 α毒素 环介导等温扩增 检测 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.05.15

馆 藏 号：203934692...