RNA干扰靶向抑制自噬调控基因Beclin 1对结肠癌细胞株HCT116自噬活性及增殖/凋亡的影响

作     者：吴淑华 何双 胡金龙 温菲菲 孙晨博 田东 WU Shu-hua;HE Shuang;HU Jin-long;WEN Fei-fei;SUN Chen-bo;TIAN Dong

作者机构：滨州医学院附属医院病理科滨州256603 

基　　金：山东省科技发展计划项目(2010GSF10259) 

出 版 物：《临床与实验病理学杂志》 (Chinese Journal of Clinical and Experimental Pathology)

年 卷 期：2014年第30卷第6期

页      码：599-604页

摘      要：目的应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制自噬调控基因Beclin 1的表达,检测Beclin 1表达对mTOR、ULK1、LC3-B的表达以及对HCT116细胞株增殖与凋亡的影响。方法设计4条针对Beclin 1基因的干扰RNA表达载体及阴性对照载体分别瞬时转染HCT116细胞。采用RT-PCR及Western blot法筛选出1条抑制率最高的Beclin 1干扰序列后,瞬时转染HCT116细胞,检测mTOR、ULK1及LC3-B的mRNA及蛋白表达,CCK-8实验检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 (1)转染细胞后,BECN1-1245组mRNA及蛋白抑制率最高,达80%。(2)RT-PCR结果显示,BECN1-1245组转染细胞48 h后,与阴性对照组相比,ULK1与LC3-B mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P≤0.05),mTOR在两组中的表达无差异(P>0.05),Western blot法检测结果与之相同。(3)CCK-8细胞增殖实验显示,BECN1-1245组转染24、48、72 h后,细胞生存率较阴性对照组明显降低(P≤0.05)。(4)流式细胞仪检测结果显示,BECN1-1245组转染48 h后,与阴性对照组细胞相比,细胞凋亡率明显升高(P≤0.05)。结论 Beclin 1在HCT116细胞自噬中发挥重要的调控作用,抑制Beclin 1的表达,可抑制细胞的自噬活性,并能抑制细胞增殖,促进其凋亡,推测Beclin 1基因可作为结肠癌治疗的新靶点。

主 题 词：结肠肿瘤 自噬 RNA干扰 增殖 凋亡 Beclin 1 HCT116 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.13315/j.cnki.cjcep.2014.06.003

馆 藏 号：203935431...