靶向Rap1b基因shRNA慢病毒载体的构建及其对食管鳞癌细胞Rap1b基因表达的沉默

作     者：张明鑫 樊晴伶 叶文广 姚青林 闻勤生 王景杰 Zhang Mingxin;Fan Qingling;Ye Wenguang;Yao Qinglin;Wen Qinsheng;Wang Jingjie

作者机构：第四军医大学唐都医院消化内科陕西西安710038 

基　　金：国家自然科学基金项目(编号:81302055) 唐都医院科技发展基金项目(编号:2012CXTS002) 

出 版 物：《现代肿瘤医学》 (Journal of Modern Oncology)

年 卷 期：2014年第22卷第8期

页      码：1757-1761页

摘      要：目的:设计以Rap1b基因为靶点的短发夹状RNA(shRNA),构建重组慢病毒表达载体并转染食管鳞癌细胞,观察其在食管鳞癌细胞中的表达。方法:应用重组DNA技术,将设计好的4条基因特异性shRNA序列插至慢病毒表达载体pGLV3-GFP中,构建pGLV3-GFP-Rap1b-shRNA1/2/3/4。并应用脂质体法转染293T细胞,进行病毒包装及滴度测定。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染食管鳞癌细胞株Eca109后Rap1b基因的表达情况。结果:测序证实慢病毒载体构建成功,并测定滴度为1×109TU/ml,pGLV3-GFP-Rap1b-shRNA3/4转染后72h和96h均可显著抑制Rap1b基因mRNA及蛋白的表达。结论:成功构建Rap1b基因的shRNA慢病毒载体,所介导的RNAi能有效抑制食管鳞癌细胞Eca109中Rap1b基因的表达。

主 题 词：Rap1b 短发夹状RNA 慢病毒载体 食管鳞癌 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-4992.2014.08.05

馆 藏 号：203935652...