shRNA沉默NRP-1基因抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的体内外研究

作     者：孙瑾 王亮 娄卫华 曹华 田秀芬 桑建中 Sun Jin;Wang Liang;Lou Weihua;Cao Hua;Tian Xiufen;Sang Jianzhong

作者机构：郑州大学第一附属医院咽喉头颈外科450052 

出 版 物：《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》 (Chinese Journal of Otorhinolaryngology Head and Neck Surgery)

年 卷 期：2015年第50卷第4期

页      码：312-317页

摘      要：目的 构建靶向神经纤毛蛋白质1（Neuropilin-1,NRP-1）的短发卡RNA （shRNA）表达载体,观察NRP-1对人鼻咽癌细胞系CNE-2Z细胞生长增殖的影响.通过体内裸鼠成瘤实验观察最优质粒对肿瘤的抑制效果.方法 根据NRP-1 mRNA序列设计并构建3个靶向NPR-1基因,并含荧光素标记的shRNA真核表达载体（pSilencer-shRNA1、pSilencer-shRNA2和pSilencer-shRNA3）;以脂质体Lipofectamine 2000转染的方法将shRNA表达质粒转导入CNE-2Z细胞及裸鼠瘤体内,于激光共聚焦荧光显微镜观察shRNA转染表达情况;以四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖活性;实时定量PCR（RT-PCR）检测NRP-1基因在mRNA水平表达的抑制作用;Western印迹法在蛋白水平上检测对目的基因的封闭效果.体内裸鼠成瘤实验观察质粒对肿瘤的抑制效果.结果 质粒成功转染CNE-2Z细胞及瘤体,可见大量的癌细胞表达绿色荧光.MTT实验证明NRP-1 shRNA抑制CNE-2Z细胞的生长增殖;RT-PCR结果表明NP-1的mRNA表达降低;Western印迹法结果验证目的基因蛋白同时表达下调;体内裸鼠成瘤实验证实转染6周后,转染组瘤体积生长较阴性对照组、空白对照组明显受到抑制[（0.599 ±0.002）比（1.141 ±0.013）、（1.165 ±0.308）cm^3,均P＜0.05],抑瘤率为48.6％.结论 表达shRNA的NRP-1基因特异的真核表达质粒能有效转染体内、外鼻咽癌细胞,沉默NRP-1基因能有效抑制鼻咽癌细胞生长增殖.为鼻咽癌基因治疗奠定了良好的实验基础。

主 题 词：神经纤毛蛋白质1 鼻咽肿瘤 基因治疗 裸鼠成瘤 Neuropilin-1 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1673-0860.2015.04.010

馆 藏 号：203935901...