数字PCR检测非小细胞肺癌患者血浆EGFR基因T790M突变平台的建立

作     者：黄斐 虞倩 吴炯 邬升超 王蓓丽 张春燕 郭玮 潘柏申 Huang Fei;Yu Qian;Wu Jiong;Wu Shengchao;Wang Beili;Zhang Chunyan;Guo Wei;Pan Paishen

作者机构：复旦大学附属中山医院检验科上海200032 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81572064) 上海市卫生计生系统重要薄弱学科建设项目(2015ZB0201) 

出 版 物：《中华检验医学杂志》 (Chinese Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2016年第39卷第3期

页      码：170-175页

摘      要：目的建立数字PCR（dPCR）检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者表皮生长因子受体（EGFR）基因T790M突变平台，并评估其基本性能和临床价值。方法方法学建立。收集2014年1月至2015年10月于复旦大学附属中山医院就诊的10例经EGFR—TKI治疗后发生耐药的NSCLC患者。设计EGFR基因T790M突变及野生型的引物及特异性探针，建立dPCR检测EGFR基因T790M突变平台，根据白配不同浓度标准品质粒验证该检测平台空白限、灵敏度和线性以建立最适报告和复检流程。采用dPCR和扩增受阻突变系统（ARMS）检测患者肺癌组织和血浆标本，卡方检验比较两种方法检测不同标本类型的EGFR基因T790M突变一致性，Pearson相关分析dPCR检测肺癌组织和血浆突变分子丰度的相关性。结果dPCR检测平台空白限为10拷贝，功能灵敏度为0．01％，且在0．01％～100％范围内线性良好（Y=1．226X-3．984，R^2=0．999）。dPCR和ARMS检测肺癌组织EGFR基因T790M突变一致性较高（kappa=0．80），而dPCR检测血浆突变阳性率高于ARMS（50％VS20％，P〈0．05）Pearson相关分析发现dPCR检测肺癌组织和血浆突变分子丰度高度相关（R=0．923，P〈0．05）。结论建立了高灵敏、绝对定量的dPCR检测EGFR基因T790M突变平台，其联合血浆etDNA能真正实现“液体活检”，对指导耐药后患者个体化治疗有重要价值。

主 题 词：聚合酶链反应 肺肿瘤 受体,表皮生长因子 DNA突变分析 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2016.03.006

馆 藏 号：203936257...