荧光定量PCR检测TTV方法学建立及初步临床应用

作     者：杨建荣 陈晓东 陶志华 

作者机构：温州医学院附属第一医院检验科浙江温州325000 

出 版 物：《检验医学教育》 

年 卷 期：2003年第10卷第2期

页      码：43-46页

摘      要：目的:建立一种灵敏度高、特异性好、精密度高、操作简便的荧光实时定量PCR技术,对临床标本中的TTV DNA进行定量检测。方法:设计针对TTV基因保守序列非转录区(UTR)的一对引物和一条荧光基团双标记探针。将PCR扩增所得的产物片段与PUCm—T载体连接并进行克隆,提取重组质粒以极限稀释法进行定量,作为定量检测的标准品。通过对重组质粒的测序来验证方法的特异性。通过与套式PCR-ELISA方法阳性检出率的比较,显示本方法学的高灵敏度。在临床研究中,通过对36例丙肝患者及123例不同血清标志物阳性的乙肝患者,166例健康体检者血清中TTV DNA的定量检测,评估TTV DNA在不同人群中检出阳性率的差异显著性。此外还观察了乙肝患者不同血清ALT水平组别TTV DNA阳性检出率的差别。结果:本方法检测TTV—DNA的灵敏度高于基于ORFl的普通套式PCR-ELISA方法,重组质粒测序结果显示方法有很好的特异性;通过重组质粒标本梯度稀释检测显示该方法的线性范围为10^(2～7)拷贝/ml;批间CV为13.2—16.0%,批内CV为6.5.0—11.3%。健康体检者、丙肝患者、乙肝患者三组人群的血清TTV DNA定量结果分别为10^(4.11±0.97)、10^(3.91±1.07)、10^(3.89±0.99)拷贝/ml;三组人群TTV DNA阳性检出率无差异显著性;且乙肝患者(TTV DNA+)血清ALT水平与TTV DNA载量无相关显著性(P>0.1);乙肝患者血清ALT异常与正常两组TTV DNA阳性检出率无差异显著性(P>0.1)。结论:本方法操作简单、灵敏度高、特异性好、结果数据化,适合于临床实验室进行临床标本的TTV—DNA定量检测。

主 题 词：荧光定量PCR 检测 TTV 方法学 临床应用 实验室诊断 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

馆 藏 号：203936725...