小鼠肝炎病毒实时荧光定量PCR方法的建立及在部分啮齿类动物的应用

作     者：王吉 王莎莎 付瑞 王淑菁 李威 秦骁 黄宗文 李晓波 巩薇 岳秉飞 贺争鸣 WANG Ji;WANG Shasha;FU Rui;WANG Shujing;LI Wei;QIN Xiao;HUANG Zongwen;LI Xiaobo;GONG Wei;YUE Bingfei;HE Zhengming

作者机构：中国食品药品检定研究院国家实验动物微生物遗传检测中心北京102629 

基　　金：国家科技支撑计划(2015BAI09B02) 

出 版 物：《实验动物与比较医学》 (Laboratory Animal and Comparative Medicine)

年 卷 期：2020年第40卷第2期

页      码：95-103页

摘      要：目的建立小鼠肝炎病毒(MHV)实时荧光定量PCR检测方法,并初步应用于实验裸鼹鼠等啮齿类动物的检测。方法选择MHV E基因保守区域设计合成特异性引物和探针,建立荧光定量PCR方法,并对方法特异度、敏感度、线性、重复性和稳定性进行方法学验证。同时用建立的方法对79只清洁级小鼠、35只SPF小鼠、63只裸鼹鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠进行MHV检测。结果成功建立了MHV实时荧光定量PCR方法;方法的线性范围为(1×10~1~1×10~9)拷贝/μL,与仙台(SV)病毒、呼肠孤病毒3型(Reo3)、小鼠肺炎病毒(PVM)、牛冠状病毒(BCV)均无交叉反应,方法的检测敏感度为10拷贝/μL。重复性和稳定性试验显示实验间变异系数均小于5%。检测结果显示63只裸鼹鼠、35只SPF小鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠均为阴性。79只清洁级小鼠MHV阳性率为22.78%。建立的方法与RT-PCR比较,可信度达97.47%。结论建立的MHV荧光定量PCR方法特异、敏感,能够对多种啮齿类动物体内携带的MHV进行检测。

主 题 词：小鼠肝炎病毒 实时荧光定量PCR方法 啮齿类动物 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 100103[100103] 071005[071005] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-5817.2020.02.002

馆 藏 号：203937037...