CRISPR-Cas13a辅助RAA快速检测金黄色葡萄球菌的研究

作     者：苏璇 葛以跃 张倩 朱小娟 陈银 吴涛 乔乔 赵康辰 吴斌 王祥喜 庞正 朱凤才 崔仑标 SU Xuan;GE Yi-yue;ZHANG Qian;ZHU Xiao-juan;CHEN Yin;WU Tao;QIAO Qiao;ZHAO Kang-chen;WU Bin;WANG Xiang-xi;PANG Zheng;ZHU Feng-cai;CUI Lun-biao

作者机构：南开大学药学院天津300000 国家卫生健康委员会肠道病原微生物重点实验室江苏省疾病预防控制中心 中国科学院生物物理研究所 天津国际生物医药联合研究院 

基　　金：国家科技重大专项(No.2017ZX10302301-004) 江苏省社会发展项目(No.BE2019761) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2020年第15卷第3期

页      码：253-258页

摘      要：目的建立一种金黄色葡萄球菌快速分子检测技术。方法根据金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因(nuc)保守区序列设计合成特异性引物,通过对反应条件进行优化,建立金黄色葡萄球菌重组酶介导的等温扩增技术(Recombi-naseaidedamplification,RAA);表达纯化CRISPR-Cas13a蛋白,设计特异的crRNA(CRISPR RNA),以crRNA引导CRISPR-Cas13a蛋白对RAA产物进行检测;对优化的方法进行灵敏性和特异性评价,同时采用该方法与real-timePCR法对食品标本中的金黄色葡萄球菌进行检测,评价方法的一致性。结果CRISPR-Cas13a辅助RAA检测金黄色葡萄球菌的灵敏度为101 CFU/ml,高于real-timePCR,约102 CFU/ml,检测时间仅需30min,与其他食源性致病菌无交叉反应;该方法和real-timePCR检测80份食品样品的阳性率均为8.75%,具有高度一致性(Kappa=1,P>0.05)。结论建立的CRISPR-Cas13a辅助RAA方法具有简便、快速、灵敏、特异等优点,为金黄色葡萄球菌的检测提供了新的技术手段。

主 题 词：RAA CRISPR-Cas13a 金黄色葡萄球菌 快速分子检测 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13350/j.cjpb.200302

馆 藏 号：203937302...