非洲猪瘟病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：吴亚楠 朱潇静 周博伦 张博 刘晴晴 郑兰兰 魏战勇 WU Ya-nan;ZHU Xiao-jing;ZHOU Bo-lun;ZHANG Bo;LIU Qing-qing;ZHENG Lan-lan;WEI Zhan-yong

作者机构：河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南省动物性食品安全重点实验室河南郑州450002 

基　　金：国家重点研发计划资助项目(2018YFD0501205) 许昌市基础与前沿资助项目(JC2018005) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2020年第40卷第5期

页      码：888-891,896页

摘      要：建立一种TaqMan荧光定量PCR检测方法,用于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)保守结构蛋白P72基因的检测。参照GenBank登录的ASFV P72相关基因序列,设计合成1对特异性引物与1个TaqMan探针,通过对反应条件和反应体系进行优化,建立了快速检测ASFV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,对该方法的灵敏性、特异性与重复性进行了验证。结果显示,该方法能有效扩增1.0×10^0~1.0×10^9拷贝/μL ASFV-P72标准质粒,建立的标准曲线呈现良好的线性关系;检测灵敏度为1.0×10^0拷贝;对猪流行性腹泻病毒、猪δ冠状病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒等病原不发生交叉反应;重复性试验结果显示变异系数(CV)小于1%。结果表明,本试验建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法具有良好的灵敏性、特异性和重复性,可用于临床样本中ASFV的检测,从而更好地对ASF疫情进行监测和诊断。

主 题 词：非洲猪瘟病毒 P72基因 TaqMan实时荧光定量PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.05.03

馆 藏 号：203938737...