实时荧光PCR检测蜡样芽胞杆菌重组质粒标准的构建

作     者：田绿波 左浩江 陈肖潇 周倩 樊学军 吴志云 裴晓方 Tian Lvbo;Zuo Haojiang;Chen Xiaoxiao;Zhou Qian;Fan Xuejun;Wu Zhiyun;Pei Xiaofang

作者机构：四川国际旅行卫生保健中心成都610041 四川大学公共卫生学院医学检验教研室成都610041 

基　　金：四川省科技厅科技攻关项目(05SG022-001-3) 国家质量监督检验检疫总局科研计划项目(J2005J0115) 

出 版 物：《中国国境卫生检疫杂志》 (Chinese Journal of Frontier Health and Quarantine)

年 卷 期：2008年第31卷第4期

页      码：281-284页

摘      要：〔目的〕构建蜡样芽胞杆菌16s-23sITS重组质粒,为实时荧光PCR检测蜡样芽胞杆菌提供质粒标准。〔方法〕选择蜡样芽胞杆菌16s-23sITS特异基因作为目的靶序列,设计、合成引物和探针,采用普通PCR扩增特异靶序列,克隆到pGM-T载体后,转化感受态大肠埃希菌DH5,α经蓝白斑筛选,再分别用EcoRI酶切,普通PCR及测序3种方法证实目的片段已成功重组。建立荧光定量PCR检测蜡样芽胞杆菌的标准曲线。〔结果〕成功构建目的重组质粒,并以此为标准制作荧光定量PCR标准曲线,重组质粒标准具有较大的线性范围(102copies/μl～108copies/lμ)和灵敏度。〔结论〕该方法构建的16s-23sITS基因重组质粒能满足实时荧光定量测定对参考标准的要求,为后续实时荧光PCR快速检测蜡样芽胞杆菌的推广应用提供了条件。

主 题 词：杆菌,蜡样芽胞 TaqManTM探针 重组质粒 实时荧光定量PCR 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-9770.2008.04.021

馆 藏 号：203940550...