双片段survivin短发夹RNA腺病毒载体的构建与鉴定

作     者：高鹏 单玉喜 阳东荣 GAO Peng;SHAN Yu-xi;YANG Dong-rong

作者机构：苏州大学附属第二院泌尿外科江苏苏州215004 

基　　金：江苏省高校自然科学基金(04KJB320128) 

出 版 物：《中华男科学杂志》 (National Journal of Andrology)

年 卷 期：2008年第14卷第4期

页      码：324-327页

摘      要：目的:构建负载双片段survivin短发夹RNA(shRNA)的腺病毒载体,为PCa的基因治疗提供实验基础。方法:分别设计2条靶向survivin基因的shRNA,克隆至穿梭质粒载体中,特异性酶切后亚克隆至腺病毒骨架,构建负载2条survivin shRNA的RNA干扰重组腺病毒载体。提取环状重组病毒质粒进行PCR、酶切双重鉴定后,大规模提取纯化正确的克隆。最后将线性化的重组腺病毒基因组转染至HEK293A包装细胞包装成病毒,并扩增到所需滴度。结果:负载双片段survivin shRNA的穿梭质粒载体pShuttle2经MluⅠ酶切鉴定,证实双片段survivinshRNA插入正确;完成目的片段至腺病毒骨架的亚克隆后,PCR及PI-SceⅠ/I-CeuⅠ双酶切鉴定均证实双片段sur-vivin shRNA插入正确。结论:负载双片段survivin shRNA腺病毒载体构建成功。

主 题 词：前列腺癌 腺病毒载体 survivin 短发夹状RNA 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-3591.2008.04.008

馆 藏 号：203941509...