利用CRISPR/Cas9技术对鸡AMHR2基因进行精确编辑

作     者：黄思嘉 祝梦琦 李鹏程 张智英 魏泽辉 HUANG Sijia;ZHU Mengqi;LI Pengcheng;ZHANG Zhiying;WEI Zehui

作者机构：西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 

基　　金：国家自然科学基金(31501990) 

出 版 物：《家畜生态学报》 (Journal of Domestic Animal Ecology)

年 卷 期：2020年第41卷第6期

页      码：12-18页

摘      要：为了在鸡基因组上对AMHR2基因进行精确编辑,该研究利用***:807网站设计并通过PCR退火拟合获得成对的AMHR2基因靶位点,将靶位点分别整合进pX330-U6-Chimeric_dBsa I-CBh-hSpCas9载体骨架,构建靶向AMHR2基因的成对CRISPR/Cas9敲除载体。将包含成对靶位点的DNA序列整合进pB-CMV-DsRed-CAG-Chimeric.200 bp ***-T2A-GFP载体骨架,构建与敲除载体对应的双荧光报告载体。载体测序鉴定正确后分别共转染HEK293T细胞与鸡DF-1细胞,通过细胞荧光粗略判断CRISPR/Cas9系统是否工作。随后,利用Puromycin对基因编辑阳性的DF-1细胞进行药物筛选富集,提取细胞基因组进行TA克隆,进一步检测CRISPR/Cas9系统的工作效率。结果表明靶向鸡AMHR2基因的CRISPR/Cas9敲除系统构建成功,且成对靶位点敲除系统的工作效率高于单一靶位点敲除系统,CRISPR/Cas9敲除系统在DF-1细胞基因组上对AMHR2基因的敲除效率约为60.0%,并在鸡DF-1细胞基因组上实现了AMHR2基因的精确编辑。

主 题 词：CRISPR/Cas9 基因敲除 AMHR2 鸡 

学科分类：07[理学] 0713[0713] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-1182.2020.06.003

馆 藏 号：203943358...