抗A型肉毒神经毒素中和抗体间接ELISA的建立

作     者：王爱秀 苏娟 魏子昊 张若晖 王璇 陆俭 叶婷 赵涛 李小娟 张雪平 WANG Ai-xiu;SU Juan;WEI Zi-hao;ZHANG Ruo-hui;WANG Xuan;LU Jian;YE Ting;ZHAO Tao;LI Xiao-juan;ZHANG Xue-ping

作者机构：兰州生物技术开发有限公司质量检定室甘肃兰州730046 

出 版 物：《微生物学免疫学进展》 (Progress In Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2020年第48卷第3期

页      码：7-14页

摘      要：目的建立间接ELISA,检测血清中抗A型肉毒神经毒素(botulinum neurotoxin type A, BoNT-A)中和抗体。方法以纯化的BoNT-A作为包被抗原,抗BoNT-A兔血清作为一抗,辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记的金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococal Protein A, SPA)作为二抗,结合实验设计,建立检测血清中抗BoNT-A中和抗体的间接ELISA,验证该方法的特异性、灵敏度和重复性,并与经典动物中和试验法检测抗BoNT-A中和抗体的结果进行比较。结果①间接ELISA条件的建立与优化,使用2.50μg/mL纯化的BoNT-A抗原包被,4℃过夜;1%明胶作为封闭剂,37℃封闭2 h;确定一抗优化条件:反应条件为1∶5 000稀释,37℃孵育90 min;二抗优化条件:反应条件为1∶10 000稀释,37℃孵育90 min;加入底物37℃显色10 min,加终止液终止后,用酶标仪测定A450 nm值;②经过验证该方法特异性好,所包被抗原与抗伤寒杆菌兔血清、抗破伤风毒素兔血清、抗B型肉毒毒素兔血清、抗E型肉毒毒素兔血清、抗F型肉毒毒素兔血清均无交叉反应;灵敏度高,当抗BoNT-A兔血清按照1∶320 000稀释时,检测结果依然呈阳性;重复性良好,批内重复性验证CV分别为2.62%、1.40%、2.14%,变异系数均小于3%,批间差异无统计学意义(P=0.103,P>0.05);该方法检测抗BoNT-A中和抗体检出限为抗-0.03 LD50/mL,大约是经典动物中和试验法的1/30,显著地提高了检测灵敏度。结论建立了一种可用于检测血清中抗BoNT-A中和抗体的间接ELISA。

主 题 词：A型肉毒神经毒素 抗A型肉毒神经毒素中和抗体 间接ELISA 血清 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.13309/j.cnki.pmi.2020.03.002

馆 藏 号：203943911...