猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性纳米抗体的原核表达研究

作     者：王长江 曲光刚 武曰星 赵中伟 郭广君 全洪坤 韩强 沈志强 WANG Chang-jiang;QU Guang-gang;WU Yue-xing;ZHAO Zhong-wei;GUO Guang-jun;QUAN Hong-kun;HAN Qiang;SHEN Zhi-qiang

作者机构：山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 中国农业大学北京100000 

基　　金：山东省自然科学基金资助项目(ZR2018PC027) 山东省重点研发计划(2017JHZ007) 

出 版 物：《中国兽药杂志》 (Chinese Journal of Veterinary Drug)

年 卷 期：2020年第54卷第5期

页      码：10-17页

摘      要：为利用大肠埃希菌表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白特异性纳米抗体,并对其抗原结合活性进行鉴定,以Cap蛋白特异性纳米抗体基因(vhh cap)序列为模板,利用Primer 5.0软件设计一对通用vhh cap特异性扩增引物,通过PCR方法扩增vhh cap基因片段,经双酶切处理后分别克隆到pCold-SUMO和pET-32a(+)载体上,转化宿主菌*** BL21(DE3),使用IPTG进行诱导表达,表达产物通过Ni 2+亲和层析柱进行纯化,经SDS-PAGE分析和Western blotting鉴定,同时使用ELISA方法对两种载体表达的纳米抗体ELISA效价进行检测和对比分析。SDS-PAGE结果显示pCold-SUMO和pET-32a(+)载体均能实现VHH cap纳米抗体重组蛋白的原核可溶性表达,Western blotting表明纳米抗体重组蛋白可通过6×His-Tag进行检测;ELISA结果显示pCold-SUMO载体表达的纳米抗体重组蛋白效价为1∶500,ELISA效价明显高于pET-32a(+)载体表达产物。PCV2 Cap特异性纳米抗体成功表达为PCV2检测及治疗用新型的抗体开发奠定了基础。

主 题 词：猪圆环病毒2型 纳米抗体 原核表达 ELSIA效价 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.11751/ISSN.1002-1280.2020.05.02

馆 藏 号：203944936...