利用CRISPR/Cas9技术建立PTEN敲除的人子宫内膜腺癌细胞模型及其功能研究

作     者：李宇恒 邓诚思 关爱伟 宋晓宇 冯艳玲 关奕 曹流 LI Yuheng;DENG Chengsi;GUAN Aiwei;SONG Xiaoyu;FENG Yanling;GUAN Yi;CAO Liu

作者机构：中国医科大学转化医学研究院沈阳110122 

基　　金：国家自然科学基金(81770001) 辽宁省自然科学基金(20180550132) 辽宁省教育厅自然科学类基础项目(JC2019040) 辽宁省高等学校基本科研项目(LFWK201725) 

出 版 物：《中国医科大学学报》 (Journal of China Medical University)

年 卷 期：2020年第49卷第7期

页      码：582-585页

摘      要：目的利用CRISPR/Cas9技术构建靶向PTEN的基因编辑质粒,构建PTEN稳定敲除的人子宫内膜腺癌细胞株KLE,并初步探讨PTEN敲除对子宫内膜癌细胞生物学功能的影响。方法设计靶向人PTEN基因的sgRNA序列,构建puro-cas9-PTENsgRNA质粒,测序验证;将重组质粒转染人子宫内膜腺癌细胞KLE,嘌呤霉素筛选获得PTEN稳定敲除细胞株;用T7E1酶切实验检测切割效率,Western blotting检测PTEN的蛋白表达水平,并检测细胞自噬相关因子LC3、P62的表达水平,检测细胞活性,探讨PTEN敲除对子宫内膜癌细胞自噬的调控作用。结果 CRISPR/Cas9系统对KLE细胞基因组中的PTEN进行了切割,并在同源重组时发生了碱基错配,PTEN被成功敲除;PTEN敲除降低了细胞自噬相关因子LC3Ⅰ型向Ⅱ型转化,增加了P62的累积。PTEN敲除的细胞活性增强。结论利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在人子宫内膜腺癌细胞中成功敲除PTEN,抑制了人子宫内膜腺癌细胞的自噬水平,为后续研究提供了细胞模型。

主 题 词：PTEN CRISPR/Cas9 细胞自噬 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071009[071009] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 090102[090102] 

D　O　I：10.12007/j.issn.0258-4646.2020.07.002

馆 藏 号：203946875...