单核细胞增生性李斯特菌LAMP-浊度/荧光检测方法的建立

作     者：贺生芳 郭澍强 谈静惠 郝俊虎 HE Sheng-fang;GUO Shu-qiang;TAN Jing-hui;HAO Jun-hu

作者机构：银川海关技术中心宁夏银川750001 

基　　金：国家重大科学仪器设备开发专项项目(2012YQ09019704) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2020年第41卷第7期

页      码：48-52页

摘      要：将环介导等温扩增技术(LAMP)分别与浊度信号检测系统(turbidimeter)和荧光信号检测系统(fluorescence)相结合,建立了LAMP-浊度/荧光单核细胞增生性李斯特菌检测方法。选择单核细胞增生性李斯特菌保守毒力基因iap序列,通过环介导等温扩增引物设计在线软件设计4条特异性引物,进行反应条件的优化,并对建立的LAMP的特异性和灵敏度进行评价分析。结果表明,构建的LAMP-浊度信号检测方法优化后的扩增温度为61℃,菌液最低检测浓度为22.1 CFU/mL,灵敏度是普通PCR扩增方法的10倍;LAMP-荧光信号检测方法优化后的扩增温度为64℃,菌液最低检测浓度为2.21 CFU/mL,灵敏度是普通PCR扩增方法的100倍;建立的两种LAMP方法的特异性良好,其中1株单核细胞增生性李斯特菌标准菌株和1株本试验分离保存的单核细胞增生性李斯特菌检测结果均为阳性,8株非单核细胞增生性李斯特菌检测结果均为阴性。利用两种LAMP方法对630份肉类及其制品、人工污染样品等进行检测,检出45个LAMP阳性,与国标法(GB)检测结果一致。结果表明,建立优化的单核细胞增生性李斯特菌LAMP-浊度/荧光检测方法具有快速、特异、灵敏等特点,特别适用于基层兽医、食品及口岸一线部门对单核细胞增生性李斯特菌快速筛查工作。

主 题 词：环介导等温扩增 浊度 荧光 单核细胞增生性李斯特菌 

学科分类：090601[090601] 090602[090602] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16437/j.cnki.1007-5038.2020.07.010

馆 藏 号：203948480...