鸭坦布苏病毒、鸭肠炎病毒和番鸭细小病毒TaqMan三重实时荧光定量PCR检测方法的建立与临床应用

作     者：吴双 姜勇 徐建生 吴植 谢军 宋海港 魏若瑶 高悦 朱善元 WU Shuang;JIANG Yong;XU Jian-sheng;WU Zhi;XIE Jun;SONG Hai-gang;WEI Ruo-yao;GAO Yue;ZHU Shan-yuan

作者机构：江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室江苏泰州225300 扬州大学兽医学院江苏扬州225009 

基　　金：江苏省“333工程”项目(BRA2018376) 江苏省“333”高层次人才培养工程项目 江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(18)1004] 江苏省“六大人才高峰”项目(NY-009) 大学生创新创业训练计划项目(201912806030Y) 

出 版 物：《江苏农业学报》 (Jiangsu Journal of Agricultural Sciences)

年 卷 期：2020年第36卷第3期

页      码：626-633页

摘      要：本研究旨在建立一种快速、敏感和高特异性检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭肠炎病毒(DEV)和番鸭细小病毒(MDPV)的TaqMan三重实时荧光定量PCR(q-PCR)的诊断方法并应用于临床疑似样品检测。根据DTMUV的E基因、DEV的UL2基因和MDPV的VP3基因保守区域,分别设计合成了3对特异性引物和探针,在建立单重q-PCR方法的基础上建立了三重q-PCR方法。运用三重q-PCR方法对198份来自江苏和安徽的鸭组织疑似病料进行检测,结果表明,建立的TaqMan三重q-PCR可同时检测这3种病毒,检测灵敏度至少达100个拷贝,相关系数(R2)均在0.99以上,扩增效率为90%~110%。同时,该方法对H9亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)、鸭甲肝病毒Ⅰ型(DHAV-1)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、鸭呼肠孤病毒(DRV)、新城疫病毒(NDV)、鹅细小病毒(GPV)的检测均为阴性,表明该方法具备特异性强、灵敏度高、重复性好和快速等优点。与常规PCR检测方法相比,三重q-PCR方法灵敏度大约高100倍。临床疑似样品检测结果表明DTMUV的检出率最高,3种病毒混合感染亦常见。建立的TaqMan三重q-PCR检测方法为DTMUV、DEV和MDPV的临床样品检测提供了快速、有效、特异和灵敏的工具,也为临床分子流行病学调查及定量分析奠定了基础。

主 题 词：鸭坦布苏病毒 鸭肠炎病毒 番鸭细小病毒 TaqMan实时荧光定量PCR 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-4440.2020.03.014

馆 藏 号：203949427...