PPARγ基因RNA干扰质粒的构建与鉴定

作     者：龚青 徐进文 徐祖敏 高国全 GONG Qing;XU Jinwen;XU Zumin;GAO Guoquan

作者机构：广州医学院基础学院生化教研室广东广州510182 中山大学中山医学院生化教研室广东广州510080 广州中医药大学基础学院生理教研室广东广州510006 

基　　金：国家自然科学基金(31101003) 广东省医学科学技术研究基金(B2011134) 广州医学院博士基金项目(2010C01) 

出 版 物：《分子诊断与治疗杂志》 (Journal of Molecular Diagnostics and Therapy)

年 卷 期：2012年第4卷第3期

页      码：163-166页

摘      要：目的构建表达细胞转录因子 PPARγ的 RNA 干扰(RNAi)质粒,为研究 PPARγ参与的细胞信号通路以及 PPARγ为靶点的基因治疗提供稳定转染的 RNA 干扰质粒。方法选取PPARγ基因的 19 nt 特异性序列,设计针对 PPARγ的 shRNA 序列,应用基因重组技术克隆到 pSilencer 1.0-U6表达载体中,用 EcoR I、Apa I 进行双酶切和 DNA 测序鉴定重组克隆 , 在脂质体的介导下将包含 PPARγ基因的 RNAi 重组载体转染前列腺癌细胞 PC-3。转染 48 h 后 , 收集细胞裂解液,Western blotting 分析对照组与转染组 PPARγ蛋白的表达水平。结果双酶切证实 shRNA 正确插入 pSilencer 1.0-U6 质粒,DNA 测序证实插入的序列正确;含 PPARγ基因的 RNAi 载体转染前列腺癌细胞 PC-3 细胞成功;Western blotting 结果显示,与空质粒对照组相比,转染组细胞 PPARγ表达下调。结论成功构建含人 PPARγ基因的 RNAi 载体,为研究 PPARγ参与的细胞信号通路提供了稳定转染的 RNA 干扰质粒。同时,阻断PPARγ的信号通路将为基因治疗提供一个较好的靶点,研究结果为以 PPARγ为靶点的基因治疗提供了有利工具。

主 题 词：载体 PPAR-γ RNAi 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-6929.2012.03.004

馆 藏 号：203949855...