定点突变FGF21提高表达量研究

作     者：李德山 曹荣邱 高华山 任桂萍 刘明瑶 LI Deshan;CAO Rongqiu;GAO Huashan;REN Guiping;LIU Mingyao

作者机构：东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 

基　　金：黑龙江省发改委项目(1570号) 2012年黑龙江省高校科技成果产业化前期研发培育项目(1252CGZH29) 

出 版 物：《东北农业大学学报》 (Journal of Northeast Agricultural University)

年 卷 期：2013年第44卷第3期

页      码：83-88页

摘      要：FGF21是一类具有重要糖脂代谢调节功能因子,是治疗2型糖尿病候选药物。但其在大肠杆菌中表达量低且主要以包涵体形式表达,为此根据FGF21与FGF家族同源序列差异,对FGF21进行定点突变以提高其表达量。以pSUMO-FGF21表达载体为模板,在突变位点两端设计引物,采用定点突变方法,将FGF21141位甘氨酸(G)突变为苯丙氨酸(F),构建突变FGF21表达载体pSUMO-mutFGF21;在大肠杆菌中进行表达,纯化mutFGF21蛋白。利用SDS-PAGE和Western blot鉴定分析突变蛋白,HepG2细胞糖吸收试验检测突变蛋白活性。结果成功对pSUMO-hFGF21进行突变,突变蛋白在大肠杆菌中成功表达,经SDS-PAGE分析,主要以可溶形式表达;与野生型FGF21(hFGF21)相比,表达量提高50%。Western blot表明mutFGF21可与FGF21抗体特异性反应。糖吸收试验显示mutFGF21具有与hFGF21一样生物活性并存在剂量依赖性,相比hFGF21,mutFGF21活性略有提高,说明定点突变FGF21(141位G突变为F)可显著提高FGF21表达量。

主 题 词：FGF21 定点突变 表达量 促进葡萄糖吸收活性 

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-9369.2013.03.016

馆 藏 号：203950225...