鹅星状病毒SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法的建立

作     者：白彩霞 张达 赵靓 杨侃侃 王小朋 李新路 李锦春 李永东 王勇 BAI Cai-xia;ZHANG Da;ZHAO Liang;YANG Kan-kan;WANG Xiao-peng;LI Xin-lu;LI Jin-chun;LI Yong-dong;WANG Yong

作者机构：安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 宁波市疾病预防控制中心浙江宁波315010 

基　　金：国家自然科学基金项目(31602063) 

出 版 物：《江苏农业学报》 (Jiangsu Journal of Agricultural Sciences)

年 卷 期：2020年第36卷第3期

页      码：634-638页

摘      要：为建立快速检测鹅星状病毒(GAstV)的方法,本研究根据GenBank中GAstV ORF2基因序列设计1对特异性引物,构建重组质粒pMD19-T-GAstV,以其作为标准品建立了GAstV的SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法。优化其反应条件及体系,进行特异性、敏感性和重复性试验以及临床样本检测。试验结果显示,除GAstV外,禽白血病病毒(ALV)、血清4型禽腺病毒(FAdV-4)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)和鸡传染性贫血病病毒(CIAV)等常见禽病病原利用该方法检测均呈阴性,表明其特异性良好;建立的荧光定量RT-PCR检出的最低模板含量为1μl 3.75×101拷贝,敏感性较高;组内和组间重复性试验变异系数均小于1%。利用该方法对来自安徽地区的32份临床样品进行检测,阳性检出率为43.75%,常规PCR方法阳性检出率为18.75%,阳性检出符合率100%,表明该方法可用于临床样品检测。该方法的建立为临床样品中GAstV的快速高效检测提供了技术支持。

主 题 词：鹅星状病毒 SYBR Green I荧光定量RT-PCR 检测 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-4440.2020.03.015

馆 藏 号：203950522...