针对PKM2多位点RNAi质粒载体的构建和筛选

作     者：王润秀 钟悦 刘金英 吴小云 谢富华 WANG Run-xiu;ZHONG Yue;LIU Jin-ying;WU Xiao-yun;XIE Fu-hua

作者机构：赣南医学院第一附属医院肾内科江西赣州341000 赣南医学院分析与检测实验教学中心江西赣州341000 赣南医学院生物化学与分子生物学教研室江西赣州341000 

基　　金：国家自然科学基金项目(81160258) 江西省教育厅青年基金项目(GJJ09584) 江西省卫生厅科技项目(20092084) 

出 版 物：《赣南医学院学报》 (JOURNAL OF GANNAN MEDICAL UNIVERSITY)

年 卷 期：2014年第34卷第3期

页      码：325-328,353页

摘      要：目的:构建针对M2型丙酮酸激酶(PKM2)基因3个可干扰序列设计小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)载体,为下一步探索Ad-PKM2介导PKM2 RNAi对乳腺癌细胞作用及机制建立基础。方法:根据RNAi设计软件设计并合成3对shRNA模板序列,依次将它们克隆至pGenesil载体中构建重组质粒,通过MTT检测筛选出对乳腺癌细胞株MCF-7增殖效应影响最强的RNAi序列。结果:酶切鉴定和测序结果证实RNAi载体构建成功,均能高效感染MCF-7并抑制MCF-7细胞的增殖,pGenesil-PKM2-(1+2+3)的抑制能力最强。结论:针对PKM2多靶点RNAi载体成功构建,为下一步研究PKM2被沉默后细胞生物学行为的变化打下基础。

主 题 词：M2型丙酮酸激酶 RNA干扰 小发夹RNA 乳腺癌 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1001-5779.2014.03.002

馆 藏 号：203950952...