人GINS2基因酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活检测

作     者：张曦 杨丽 李静芳 高艳章 石琼 潘玉卿 ZHANG Xi;YANG Li;LI Jing-fang;GAO Yan-zhang;SHI Qiong;PAN Yu-qing

作者机构：云南省肿瘤医院昆明医科大学第三附属医院检验科云南昆明650118 昆明医科大学第一附属医院检验科云南省实验诊断研究所云南省检验医学重点实验室云南昆明650032 

基　　金：国家自然科学基金地区项目(81760426) 云南省应用基础研究计划(2015FB070) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2020年第33卷第7期

页      码：743-747页

摘      要：目的构建人GINS2基因酵母双杂交诱饵质粒,并进行自激活检测。方法根据GenBank中登录的GINS2基因编码区序列(NM016095)设计引物,以pCDNA3.1-GINS2质粒为模板进行PCR扩增,将PCR产物克隆至诱饵载体pGBKT7上,构建诱饵质粒pGBKT7-GINS2。将鉴定正确的诱饵质粒及对照质粒共同转化至酵母细胞AH109中培养,Western blot法检测诱饵蛋白GINS2的表达,随机挑取6个菌落,进行His3、Ade2及LacZ报告基因的自激活效应检测。结果经双酶切及测序鉴定证明诱饵质粒pGBKT7-GINS2构建正确。诱饵蛋白GINS2相对分子质量为21000,可在AH109酵母细胞中稳定表达。诱饵质粒转化的酵母细胞在SD/-Trp/-Leu缺陷平板生长,在SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade缺陷平板上不生长,表明报告基因His、Ade2未被激活,报告基因LacZ检测结果与阴性对照相同,表明诱饵蛋白GINS2不存在自激活。结论成功构建了人GINS2基因酵母双杂交诱饵质粒,其表达蛋白对酵母AH109细胞无毒性,也无自激活现象,可用于后续蛋白筛选试验。

主 题 词：GINS2基因 诱饵质粒 酵母双杂交系统 酵母菌株AH109 人早幼粒细胞白血病 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.003095

馆 藏 号：203952418...