CRISPR/Cas9系统介导的人乳铁蛋白基因在山羊β-乳球蛋白基因座定点敲入

作     者：宋绍征 张婷 潘生强 陆睿 成勇 周鸣鸣 SONG Shaozheng;ZHANG Ting;PAN Shengqiang;LU Rui;CHENG Yong;ZHOU Mingming

作者机构：无锡太湖学院护理学院江苏无锡214000 扬州大学兽医学院/江苏省转基因动物制药工程研究中心江苏扬州225009 江苏食品药品职业技术学院制药工程学院江苏淮安223003 

基　　金：国家转基因生物新品种培育重大专项(2014ZX08008-004) 江苏省高校自然科学基金面上项目(19KJB180030) 无锡市科协软科学研究重点课题(KX-19-B28) 

出 版 物：《中国农业大学学报》 (Journal of China Agricultural University)

年 卷 期：2020年第25卷第7期

页      码：111-119页

摘      要：为研究山羊乳蛋白基因编辑,实现羊乳"人源化"改造。利用CRISPR/Cas9系统敲除山羊乳中致敏原β-乳球蛋白(BLG)基因,同时在BLG基因座定点敲入人乳铁蛋白(hLF)基因。针对山羊BLG基因第一外显子设计构建sgBLG/Cas9表达载体经电转染山羊胎儿成纤维细胞验证其编辑活性;将打靶载体BLC14与sgBLG/Cas9载体共转染山羊胎儿成纤维细胞,经筛选检测获得BLG^-/hLF^+打靶细胞株作为供核细胞用于山羊体细胞核移植;通过剖宫产获取克隆胎儿并验证其中靶情况。结果表明:sgBLG/Cas9编辑山羊BLG位点致突变率约为30%~35%;共筛选72株药物抗性细胞株,其中有37株为基因打靶细胞,打靶效率为51.4%(37/72);挑取形态较好的7株打靶细胞用于核移植,共制备416枚重构胚,移植30只受体山羊;30-35日龄B超诊断有13只受孕,妊娠率为43.3%(13/30);剖宫产获取3只35日龄克隆胎儿均验证为BLG^-/hLF^+基因型,并建立了BLG^-/hLF^+靶向性修饰细胞系。因此,利用CRISPR/Cas9系统可以获得BLG基因座定点打靶hLF基因的转基因克隆山羊,该研究为培育羊乳中低致敏原和富含hLF功能营养成分的转基因山羊新品系提供了科学依据。

主 题 词：CRISPR/Cas9 β-乳球蛋白 人乳铁蛋白 基因打靶 核移植 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.11841/j.issn.1007-4333.2020.07.11

馆 藏 号：203953326...