猪传染性胃肠炎病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立

作     者：焦韵洁 张欣 朱海鹏 吴小萍 贾存瑜 赵毅 周恩民 穆杨 JIAO Yun-jie;ZHANG Xin;ZHU Hai-peng;WU Xiao-ping;JIA Cun-yu;ZHAO Yi;ZHOU En-min;MU Yang

作者机构：西北农林科技大学动物医学学院陕西杨凌712100 农业部兽用药物与诊断技术陕西科学观测实验站陕西杨凌712100 陕西省动物疫病预防控制中心陕西西安710016 

基　　金：国家重点研发计划项基金资助目(2016YFD0500706) 陕西省农业科技创新转化基金资助项目(NYKJ-2018-06) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2020年第40卷第7期

页      码：1272-1279,1285页

摘      要：通过对比猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)主要流行毒株的M基因序列,选择其高度保守的区域设计LAMP引物,以羟基萘酚蓝(HNB)为指示剂,建立了1种快速检测TGEV的可视化环介导等温扩增方法。结果显示,采用建立的方法在恒温水浴锅中约1 h即可完成检测;用该方法检测猪流行性腹泻病毒,猪轮状病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒,猪细小病毒,猪圆环病毒,均不发生交叉反应;以pET-21b-M质粒为模板评价所建立方法的敏感性,最低检测限为3.7×10^3个拷贝,比普通PCR方法高2个数量级;在反应前向反应体系中加入HNB,反应结束后阳性反应管颜色从紫罗兰色变为天蓝色,阴性反应管颜色无变化,且阴阳性管颜色差异明显。用建立的方法对收集的42份临床腹泻样品进行检测,共检测到21份样品阳性。为快速检测TGEV提供方法。

主 题 词：猪传染性胃肠炎病毒 环介导等温扩增 可视化 检测方法 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.07.02

馆 藏 号：203954379...