蔗糖磷酸化酶的半理性设计及生产α-熊果苷的条件优化

作     者：沈洋 吕雪芹 林璐 李江华 堵国成 刘龙 SHEN Yang;LYU Xueqin;LIN Lu;LI Jianghua;DU Guocheng;LIU Long

作者机构：未来食品科技中心江南大学江苏无锡214122 糖化学实验室江南大学江苏无锡214122 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(31870069) 国家自然科学基金面上项目(21676119) 

出 版 物：《食品与发酵工业》 (Food and Fermentation Industries)

年 卷 期：2020年第46卷第13期

页      码：1-9页

摘      要：α-熊果苷是一种高价值糖苷,在化妆品和制药行业具有广泛的应用前景。酶法是生产α-熊果苷的主要手段,但由于缺乏高催化效率的酶而限制了α-熊果苷的生产。为了提高来自Streptococcus mutans UA159的蔗糖磷酸化酶(SmSP)的生物转化效率,进而提高α-熊果苷的产量,筛选了4种在Bacillus subtilis WB600中表达SmSP的载体,其中重组质粒pP43NMK-P43-gtfA在全细胞转化20 h后获得了最高的α-熊果苷产量(40.2 g/L)。其次,对SmSP催化活性中心周围的loop A进行了定点饱和突变,以提高酶和受体之间的亲和力,得到了突变体SmSP^I336L,其α-熊果苷产量和底物对苯二酚(hydroquinone,HQ)摩尔转化率分别为71.7 g/L和72.4%,产量相比对照提高了78.4%。最后,对重组菌株*** WB600/pP43NMK-P43-SmSP^I336L全细胞转化合成α-熊果苷反应条件进行优化,α-熊果苷的产量达到了110.3 g/L,HQ摩尔转化率为88.7%,产量相比对照提高了2.74倍。高催化效率重组菌株的构建,以及对突变体动力学的分析,对生物转化合成α-熊果苷具有重要的研究意义和应用价值。

主 题 词：蔗糖磷酸化酶 α-熊果苷 定点饱和突变 全细胞催化 

学科分类：081702[081702] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 

核心收录：

D　O　I：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.023866

馆 藏 号：203954480...