肽核酸荧光原位杂交技术检测生肉中沙门氏菌方法的建立及应用

作     者：杨彤 吴姗 李可 帅江冰 叶子弘 张晓峰 YANG Tong;WU Shan;LI Ke;SHUAI Jiang-bing;YE Zi-hong;ZHANG Xiao-feng

作者机构：中国计量大学生命科学学院浙江省生物计量与检验检疫技术重点实验室浙江杭州310018 浙江省检验检疫科学技术研究院浙江杭州310016 

基　　金：国家重点研发计划(2017YFF0210203) 浙江省重点研发计划项目(2018C02041) 海关总署科研项目(2019 HK097) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2020年第42卷第6期

页      码：584-589页

摘      要：本研究设计了一种基于沙门氏菌毒力基因侵袭蛋白A(invA)的特异性肽核酸(PNA)探针,在前期优化条件的基础上,建立并评估了沙门氏菌肽核酸荧光原位杂交(PNA-FISH)的检测方法。特异性试验结果显示,该方法的Sal-invA探针除对目标菌杂交呈阳性外,与12株常见的非目标菌杂交均为阴性,特异性强;灵敏度试验结果显示,该方法对沙门氏菌的检测限为105 cfu/mL,而荧光定量PCR方法和细菌分离培养法对沙门氏菌的最低检测限分别为102 cfu/mL和105 cfu/mL,PNA-FISH方法的灵敏度与分离培养方法相近。人工污染沙门氏菌的生肉制品,增菌培养后经上述3种方法检测的最低检测限均可达到100 cfu/mL。对83份生鲜肉经增菌培养后,用上述3种方法检测。结果显示,该方法与细菌分离培养方法和荧光定量PCR方法的符合率均达到98.8%。表明,增菌培养是提高该PNA-FISH检测方法灵敏性的重要步骤。本研究建立的检测沙门氏菌的PNA-FISH方法快速、准确、灵敏,适合用于临床肉制品的检测。

主 题 词：肽核酸 荧光原位杂交 沙门氏菌 最低检测限 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.201910002

馆 藏 号：203954533...