沉默c-fos基因对PM2.5染毒人支气管上皮细胞癌基因和凋亡相关基因表达的影响

作     者：蔡颖 郑凯 秦双建 李柏茹 余淑苑 刘宁 季佳佳 张朝晖 徐新云 CAI Ying;ZHENG Kai;QIN Shuangjian;LI Boru;YU Shuyuan;LIU Ning;JI Jiajia;ZHANG Zhaohui;XU Xinyun

作者机构：南华大学公共卫生学院湖南衡阳421001 深圳市疾病预防控制中心广东深圳518055 中南大学湘雅公共卫生学院湖南长沙410078 

基　　金：深圳市科技研发基础研究项目(JCYJ20170413101713324) 

出 版 物：《癌变．畸变．突变》 (Carcinogenesis,Teratogenesis & Mutagenesis)

年 卷 期：2020年第32卷第4期

页      码：298-303,308页

摘      要：目的:探讨沉默c-fos基因对PM2.5染毒人支气管上皮细胞(HBE细胞)癌基因和凋亡相关基因表达的影响。方法:采用RNA干扰技术,根据GenBank提供的c-fos mRNA序列,设计合成shRNA干扰序列,将重组慢病毒载体转染HBE细胞,构建c-fos基因沉默细胞株。采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot对c-fos基因沉默效果进行鉴定。以HBE细胞、c-fos基因沉默细胞为实验对象,用浓度为50μg/mL的PM2.5混悬液染毒24 h,同时设立阴性对照组,qPCR和Western blot分别检测部分癌基因c-myc、k-ras、c-fos、p53和凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8在mRNA及蛋白质表达水平的变化。结果:转染c-fos-shRNA慢病毒的HBE细胞中,经qPCR和Western blot检测发现,与对照组HBE细胞相比,c-fos m RNA表达水平下降70.1%,c-fos蛋白表达水平下降53.7%。PM2.5染毒HBE细胞后,与未染毒的对照组比较,c-myc和k-ras mRNA表达水平分别升高30.46%、27.17%,差异均有统计学意义(P<0.05),c-fos、Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达水平分别升高50.78%、71.91%、74.16%,p53 mRNA表达水平下降12.27%,差异均有统计学意义(P<0.01)。PM2.5染毒c-fos基因沉默细胞后,与未染毒组比较,c-myc、k-ras mRNA表达水平分别下降13.08%、5.39%,Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达水平分别下降25.03%、21.37%(P<0.05),p53 mRNA下降53.39%(P<0.01)。此外,c-fos基因沉默细胞染毒后,与HBE正常细胞染毒后比较,c-myc、k-ras、p53、c-fos、Caspase-3和Caspase-8的mRNA表达水平均有所下降(P<0.05);仅c-myc蛋白表达下降(P<0.01)。结论:成功构建c-fos基因沉默细胞株;PM2.5可引起HBE细胞癌基因和凋亡相关基因表达水平明显升高,c-fos基因沉默在一定程度上能抑制PM2.5对癌基因和凋亡相关基因的激活作用。

主 题 词：c-fos 大气细颗粒物 人支气管上皮细胞 基因沉默 癌基因 凋亡相关基因 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100402[100402] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-616x.2020.04.009

馆 藏 号：203956057...