PI3-K/Akt shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

作     者：张艳 高玲娟 邱文 任琎 赵聃 王迎伟 ZHANG Yan;GAO Ling-juan;QIU Wen;REN Jin;ZHAO Dan;WANG Ying-wei

作者机构：南京医科大学微生物与免疫学系江苏南京210029 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30471615) 

出 版 物：《南京医科大学学报（自然科学版）》 (Journal of Nanjing Medical University(Natural Sciences))

年 卷 期：2008年第28卷第4期

页      码：407-411页

摘      要：目的:构建针对PI3-K/Akt基因的特异性短发卡RNA(shRNA)真核表达载体。方法:用DNA重组技术将针对大鼠PI3-K/Akt基因不同位点所设计的8个shRNA序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中。在酶切分析及序列测定后,用脂质体转染至大鼠肾小球系膜细胞(GMCs),Western blot检测蛋白的相对表达量来筛选最佳沉默效率的shRNA。结果:限制性酶切及核酸序列分析证明重组质粒正确。Western blot证实在重组质粒中shPik3c3-2、shAkt1-4具有最佳沉默效率。结论:成功构建了PI3-K/Akt shRNA的真核表达质粒。该实验结果为进一步研究PI3-K/Akt信号通路的生物学功能奠定了基础。

主 题 词：PI3-K/Akt shRNA 肾小球系膜细胞(GMCs) 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-4368.2008.04.001

馆 藏 号：203956828...