酿酒酵母脂肪酶基因TGL3的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

作     者：陈英 卢福芝 曾丽娟 朱绮霞 张搏 韦宇拓 黄日波 CHEN Ying;LU Fu-zhi;ZENG Li-juan;ZHU Qi-xia;ZHANG Bo;WEI Yu-tuo;HUANG Ri-bo

作者机构：广西大学生命科学与技术学院广西南宁530005 广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心广西南宁530007 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2010年第20卷第3期

页      码：20-22页

摘      要：目的:克隆Saccharomy cescerevisiae脂肪酶基因,并实现其在Pichia pastoris中高效表达。方法:根据NCBIGenBank中已公布的Saccharomyces cerevisiae脂肪酶基因TGL3设计引物,以Saccharomyces cerevisiae总DNA为模板,PCR扩增目的片段,构建重组子pPIC9K-TGL3,转化到Pichia pastoris GS115。结果:扩增得到1929bp的基因片段,与GenBank中公布的序列氨基酸同源性达99.7%,编码的643个氨基酸中有脂肪酶的保守序列GXSXG,位于235～239位。重组子摇瓶发酵120h发酵液上清脂肪酶酶活达到60U/mL,酶学性质研究表明:该酶的最适作用温度为40℃,在25℃～40℃之间能保持60%以上酶活力。最适pH值为8.5,在pH6.5～9.0之间能保持50%以上的酶活力。除Al3+和Fe2+外,该酶不受Ca2+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Mn2+、Ni+、Sr2+等多种金属离子的影响。结论:发酵液上清脂肪酶酶活达到60U/mL,是原菌株的10倍,成功实现了该基因的高效表达。

主 题 词：酿酒酵母 脂肪酶 基因克隆 毕赤酵母 表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-311X.2010.03.020

馆 藏 号：203957244...